| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 马铃薯抗旱分子机制研究概况 | 第13-15页 |
| 1.2 植物内参基因研究概况 | 第15-17页 |
| 1.2.1 qRT-PCR技术 | 第15-16页 |
| 1.2.2 内参基因的选择及稳定性评价 | 第16-17页 |
| 1.2.3 马铃薯常用内参基因的选择 | 第17页 |
| 1.3 泛素化途径与植物逆境响应 | 第17-24页 |
| 1.3.1 泛素-蛋白酶体系统的成员 | 第18-19页 |
| 1.3.2 泛素连接酶E | 第19-21页 |
| 1.3.3 植物U-box家族基因 | 第21-24页 |
| 1.3.3.1 U-box泛素连接酶结构特点 | 第21页 |
| 1.3.3.2 植物U-box家族成员鉴定 | 第21-22页 |
| 1.3.3.3 植物U-box基因与干旱胁迫响应 | 第22-24页 |
| 1.4 植物泛素化蛋白质组分析 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 马铃薯泛素化蛋白质组学分析 | 第27-42页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 茎尖脱毒和组培苗繁育 | 第28页 |
| 2.2.2 分组与胁迫处理 | 第28页 |
| 2.2.3 Ub和26S表达量测定 | 第28-29页 |
| 2.2.3.1 总RNA提取和逆转录反应 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 qRT-PCR反应 | 第29页 |
| 2.2.4 蛋白质样品制备 | 第29-30页 |
| 2.2.5 蛋白样品胰酶酶解 | 第30页 |
| 2.2.6 泛素化肽段富集 | 第30-31页 |
| 2.2.7 LC-MS/MS分析 | 第31页 |
| 2.2.8 质谱数据分析 | 第31页 |
| 2.2.9 GO和KEGG注释 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-40页 |
| 2.3.1 Ub和26S渗透胁迫下表达量 | 第32-33页 |
| 2.3.2 总蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第33页 |
| 2.3.3 蛋白质鉴定与差异表达泛素肽段筛选 | 第33-37页 |
| 2.3.4 泛素化修饰位点特征 | 第37-38页 |
| 2.3.5 GO和KEGG功能注释 | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 马铃薯干旱和渗透胁迫下内参基因筛选 | 第42-53页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 干旱胁迫下转录组测序及潜在内参基因引物设计 | 第42-43页 |
| 3.2.2 分组与胁迫处理 | 第43-44页 |
| 3.2.3 总RNA提取和逆转录反应 | 第44页 |
| 3.2.4 qRT-PCR反应 | 第44-45页 |
| 3.2.5 基因表达稳定性分析 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.3.1 胁迫下叶片相对含水量变化 | 第45-47页 |
| 3.3.2 引物特异性和PCR扩增效率 | 第47-48页 |
| 3.3.3 潜在内参基因Ct值范围 | 第48-49页 |
| 3.3.4 潜在内参基因表达稳定性 | 第49-51页 |
| 3.3.4.1 geNorm分析 | 第49页 |
| 3.3.4.2 NormFinder分析 | 第49页 |
| 3.3.4.3 BestKeeper分析 | 第49-50页 |
| 3.3.4.4 RefFinder分析 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 马铃薯U-box家族基因鉴定及特征分析 | 第53-67页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 4.1.1 U-box基因检索 | 第53页 |
| 4.1.2 U-box基因鉴定与保守结构域分析 | 第53-54页 |
| 4.1.3 U-box基因结构分析和染色体定位 | 第54页 |
| 4.1.4 进化树构建 | 第54页 |
| 4.1.5 U-box蛋白质特征和Motif分析 | 第54-55页 |
| 4.2 结果与分析 | 第55-65页 |
| 4.2.1 马铃薯U-box基因鉴定和染色体定位 | 第55-57页 |
| 4.2.2 马铃薯U-box基因特征 | 第57-59页 |
| 4.2.3 马铃薯U-box蛋白质特征 | 第59-61页 |
| 4.2.4 U-box保守结构域 | 第61-62页 |
| 4.2.5 U-box蛋白质Motif | 第62-63页 |
| 4.2.6 U-box基因进化树 | 第63-65页 |
| 4.3 讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 StPUB27基因克隆及生物信息学分析 | 第67-79页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第67页 |
| 5.2 实验方法 | 第67-70页 |
| 5.2.1 StPUB27基因的生物信息学分析 | 第67-68页 |
| 5.2.2 总RNA提取及cDNA的合成 | 第68-69页 |
| 5.2.3 引物设计及基因克隆 | 第69页 |
| 5.2.4 克隆载体构建及基因测序 | 第69-70页 |
| 5.3 结果与分析 | 第70-77页 |
| 5.3.1 StPUB27基因和蛋白的理化性质 | 第70-71页 |
| 5.3.2 StPUB27蛋白的亚细胞定位 | 第71-72页 |
| 5.3.3 StPUB27蛋白的保守结构域和信号肽 | 第72-73页 |
| 5.3.4 StPUB27同源基因进化关系 | 第73页 |
| 5.3.5 StPUB27基因克隆及品种间序列比对 | 第73-76页 |
| 5.3.6 StPUB27启动子 | 第76-77页 |
| 5.3.7 StPUB27蛋白二级和三级结构 | 第77页 |
| 5.4 讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 StPUB27植物表达载体构建及基因功能研究 | 第79-93页 |
| 6.1 实验材料与仪器 | 第79-80页 |
| 6.2 实验方法 | 第80-86页 |
| 6.2.1 StPUB27植物过表达载体构建 | 第80-81页 |
| 6.2.2 StPUB27-RNAi载体构建 | 第81-84页 |
| 6.2.2.1 StPUB27干扰片段克隆 | 第81-82页 |
| 6.2.2.2 StPUB27i入门载体构建(BP反应) | 第82-83页 |
| 6.2.2.3 RNAi表达载体构建(LR反应) | 第83-84页 |
| 6.2.3 马铃薯遗传转化和植株再生 | 第84-85页 |
| 6.2.4 外源基因表达量检测 | 第85-86页 |
| 6.2.5 转基因株系抗旱性评价 | 第86页 |
| 6.3 结果与分析 | 第86-91页 |
| 6.3.1 马铃薯遗传转化及转基因株系鉴定 | 第86-88页 |
| 6.3.2 StPUB27转基因株系抗旱性评价 | 第88-91页 |
| 6.3.2.1 离体叶片失水率和气孔导度 | 第88-90页 |
| 6.3.2.2 叶片相对电导率 | 第90页 |
| 6.3.2.3 转基因植株叶片脯氨酸含量 | 第90-91页 |
| 6.4 讨论 | 第91-93页 |
| 结论与展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 附录 | 第106-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 个人简历 | 第124-126页 |
| 导师简介 | 第126-127页 |
