| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-20页 |
| 1.1 鸡球虫病的危害及防治现状 | 第14页 |
| 1.2 寄生虫LDH的研究概况 | 第14-19页 |
| 1.2.1 原虫LDH | 第15-16页 |
| 1.2.2 吸虫LDH | 第16-17页 |
| 1.2.3 绦虫LDH | 第17-18页 |
| 1.2.4 棘头虫LDH | 第18页 |
| 1.2.5 蜱螨LDH | 第18页 |
| 1.2.6 线虫LDH | 第18-19页 |
| 1.3 鸡球虫DNA疫苗的研究 | 第19-20页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫LDH基因的克隆及生物信息学分析 | 第20-33页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.2.2 实验虫株 | 第20页 |
| 2.2.3 实验主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.2.5 试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.2.6 收集并纯化柔嫩艾美耳球虫四个阶段虫体 | 第22-23页 |
| 2.2.7 柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.8 柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.2.9 PMD18T-EtLDH重组克隆质粒的构建与鉴定 | 第23-25页 |
| 2.2.10 EtLDH基因及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.2.11 EtLDH基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的转录水平分析 | 第26-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-32页 |
| 2.3.1 EtLDH基因PCR扩增结果 | 第27-28页 |
| 2.3.2 EtLDH阳性重组克隆质粒鉴定及测序结果 | 第28页 |
| 2.3.3 EtLDH基因及编码蛋白的生物信息学分析结果 | 第28-30页 |
| 2.3.4 EtLDH基因在虫体4个阶段的mRNA水平 | 第30-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫LDH基因的原核表达及功能初步研究 | 第33-46页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 材料与方法 | 第33-40页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第33页 |
| 3.2.2 所用虫株来源、菌种及实验细胞 | 第33页 |
| 3.2.3 实验主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.2.4 实验主要仪器 | 第34页 |
| 3.2.5 主要试剂配制 | 第34-35页 |
| 3.2.6 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.7 重组蛋白的原核表达及纯化 | 第36-37页 |
| 3.2.8 EtLDH重组蛋白抗体的制备 | 第37页 |
| 3.2.9 EtLDH在虫体不同发育阶段蛋白水平的检测 | 第37-38页 |
| 3.2.10 EtLDH在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的免疫荧光定位 | 第38-39页 |
| 3.2.11 rEtLDH多抗浓度梯度对E.tenella子孢子入侵细胞的体外抑制作用 | 第39-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-44页 |
| 3.3.1 重组表达质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.2 重组蛋白时相表达检测 | 第41页 |
| 3.3.3 EtLDH在虫体不同发育阶段蛋白水平的检测 | 第41页 |
| 3.3.4 天然蛋白EtLDH的间接免疫荧光定位 | 第41页 |
| 3.3.5 EtLDH抗体对子孢子入侵的体外抑制试验 | 第41-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 PCAGGS-ETLDH和PCAGGS-ETLDH-IFN-T重组质粒的构建与鉴定 | 第46-55页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 材料与方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第46-47页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第47页 |
| 4.2.3 PCR反应 | 第47页 |
| 4.2.4 真核表达重组质粒的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.5 293T细胞的复苏培养 | 第48页 |
| 4.2.6 Western blot鉴定真核表达重组质粒在293T细胞中表达情况 | 第48页 |
| 4.2.7 间接免疫荧光(IFA)鉴定真核表达重组质粒在293T细胞中表达情况 | 第48页 |
| 4.3 结果 | 第48-52页 |
| 4.3.1 EtLDH基因的扩增 | 第48-49页 |
| 4.3.2 IFN-γ基因的克隆 | 第49页 |
| 4.3.3 真核重组质粒的构建与鉴定 | 第49-51页 |
| 4.3.4 Western-blot分析pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ在293T细胞中的表达 | 第51-52页 |
| 4.3.5 间接免疫荧光检测pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ在293T细胞中的表达 | 第52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第五章 全文总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
