| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-34页 |
| 1.1 Bt杀虫晶体蛋白及其基因 | 第11-22页 |
| 1.1.1 Bt的生物学特性 | 第11页 |
| 1.1.2 杀虫晶体蛋白的结构 | 第11-15页 |
| 1.1.3 Bt杀虫晶体蛋白及其基因的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.4 杀虫晶体蛋白的杀虫机制 | 第16-20页 |
| 1.1.5 昆虫对晶体蛋白产生抗性的机理 | 第20-22页 |
| 1.2 Bt营养期杀虫蛋白及其基因 | 第22-25页 |
| 1.2.1 Vips的发现 | 第22页 |
| 1.2.2 Bt营养期杀虫晶体蛋白及其基因的分类 | 第22-25页 |
| 1.2.3 杀虫晶体蛋白的杀虫机制 | 第25页 |
| 1.3 杀虫基因在农业生产上的简史、商品化生产 | 第25-33页 |
| 1.3.1 Bt杀虫蛋白的应用简史 | 第26-28页 |
| 1.3.2 全球转基因作物商品化现状 | 第28-30页 |
| 1.3.3 中国的转基因研究及商品化现状 | 第30-31页 |
| 1.3.4 昆虫对转Bt作物抗性的产生及其对策 | 第31-33页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 2 材料和方法 | 第34-45页 |
| 2.1 材料 | 第34-36页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第34-35页 |
| 2.1.2 昆虫 | 第35页 |
| 2.1.3 试剂 | 第35页 |
| 2.1.4 培养基 | 第35页 |
| 2.1.5. 常用溶液 | 第35页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.2 方法 | 第36-45页 |
| 2.2.1 分子生物学常规操作 | 第36-37页 |
| 2.2.2 棉花基因偏爱密码子的优化 | 第37-38页 |
| 2.2.3 重组表达质粒的构建 | 第38-41页 |
| 2.2.4 重组表达菌株的构建 | 第41页 |
| 2.2.5 外源基因的诱导表达 | 第41页 |
| 2.2.6 肠激酶鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.7 单价与双价毒性蛋白的生物学活性测定 | 第42页 |
| 2.2.8 单价植物表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 2.2.9 双元载体的构建 | 第44-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-57页 |
| 3.1 优化前后碱基序列的分析 | 第45-47页 |
| 3.2 优化前后的基因序列比对分析 | 第47页 |
| 3.3 原核生物重组表达载体的构建与鉴定 | 第47-50页 |
| 3.4 Cry2A、Cry9C、Vip83和Vip83-Cry2A、Vip83-Cry9C蛋白在重组DE3菌株中的表达 | 第50-52页 |
| 3.5 Vip83-Cry2A蛋白的肠激酶酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 3.6 重组菌株的生测活性的分析 | 第53页 |
| 3.7 植物表达载体的构建 | 第53-57页 |
| 3.7.1 单价植物表达载体的构建与鉴定 | 第53-54页 |
| 3.7.2 双价植物表达载体的构建与鉴定 | 第54-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-77页 |
| 1. cry2A与cry2As核苷酸序列比对表 | 第67-70页 |
| 2. cry9C与cry9Cs核苷酸序列比对表 | 第70-73页 |
| 3. vip83与vip83s核苷酸序列比对表 | 第73-76页 |
| 4. 在读期间已发表文章 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |