| 目录 | 第3-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 第一章 RVG29多肽的脑靶向性评价 | 第20-38页 |
| 1 仪器和材料 | 第20-23页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第20-21页 |
| 1.2 仪器 | 第21-23页 |
| 1.3 细胞株 | 第23页 |
| 1.4 实验动物 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.1 PAMAM-PEG-RVG29的合成 | 第23页 |
| 2.2 PAMAM-PEG-RVG29的合成验证 | 第23-24页 |
| 2.2.1 ~1H-NMR | 第23页 |
| 2.2.2 巯基反应效率的测定 | 第23-24页 |
| 2.3 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的制备与表征 | 第24页 |
| 2.3.1 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的制备 | 第24页 |
| 2.3.2 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的粒径测定 | 第24页 |
| 2.3.3 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的电泳实验 | 第24页 |
| 2.4 BCECs对PAMAM-PEG-RVG29/DNA摄取情况考察 | 第24-25页 |
| 2.4.1 BCECs培养 | 第24-25页 |
| 2.4.2 BCECs对PAMAM-PEG-RVG29/DNA摄取及其机制考察 | 第25页 |
| 2.5 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒在细胞内的定位考察 | 第25页 |
| 2.6 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒跨体外BBB模型转运 | 第25-27页 |
| 2.6.1 体外BBB模型的建立 | 第25-26页 |
| 2.6.2 ~14C-蔗糖渗透系数的测定 | 第26页 |
| 2.6.3 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒跨BCECs单层转运实验 | 第26-27页 |
| 2.7 活体成像分析PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的分布 | 第27页 |
| 2.8 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒在小鼠脑内表达评价 | 第27-28页 |
| 2.8.1 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒在小鼠脑内表达分布的定型评价 | 第27页 |
| 2.8.2 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒在小鼠体内表达分布的定量评价 | 第27-28页 |
| 2.9 数据分析 | 第28页 |
| 3 实验结果 | 第28-35页 |
| 3.1 PAMAM-PEG-RVG29的合成验证 | 第28-29页 |
| 3.2 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的表征 | 第29页 |
| 3.3 BCECs对PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的摄取及机制探索 | 第29-31页 |
| 3.4 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒摄取后的细胞内定位 | 第31-32页 |
| 3.5 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒跨BCECs单层转运 | 第32-33页 |
| 3.6 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的体内分布 | 第33页 |
| 3.7 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒在脑内表达的定性考察 | 第33-34页 |
| 3.8 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒在体内表达的定量考察 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 4.1 RVG29修饰的载基因纳米粒的体外靶向性研究 | 第35-37页 |
| 4.2 PAMAM-PEG-RVG29/DNA纳米粒的体内靶向性研究 | 第37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第二章 RVG29修饰脑靶向纳米器件用于帕金森病的早期凋亡诊断 | 第38-58页 |
| 1 仪器和材料 | 第41-42页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第41-42页 |
| 1.2 仪器 | 第42页 |
| 1.3 细胞株 | 第42页 |
| 1.4 实验动物 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-46页 |
| 2.1 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的合成 | 第42-43页 |
| 2.2 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的表征 | 第43页 |
| 2.3 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的稳定性考察 | 第43页 |
| 2.4 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的细胞毒性考察 | 第43-44页 |
| 2.5 DGLs-RVG29-FRET纳米器件跨BCECs单层转运实验 | 第44页 |
| 2.6 体外caspase-3激活模型的建立 | 第44-45页 |
| 2.7 利用DGLs-RVG29-FRET纳米器件进行激活型caspase-3的体外检测 | 第45页 |
| 2.8 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的离体组织分布 | 第45页 |
| 2.9 体内caspase-3激活模型的建立 | 第45-46页 |
| 2.10 DGLs-RVG29-FRET纳米器件应用于活体caspase-3成像 | 第46页 |
| 2.11 DGLs-RVG29-FRET纳米器件在脑部分布与定位 | 第46页 |
| 2.12 数据分析 | 第46页 |
| 3 实验结果 | 第46-56页 |
| 3.1 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的合成表征 | 第46-48页 |
| 3.2 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的稳定性考察 | 第48页 |
| 3.3 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的安全性考察 | 第48-49页 |
| 3.4 DGLs-RVG29-FRET纳米器件跨BCECs单层转运 | 第49页 |
| 3.5 体外caspase-3激活模型的建立 | 第49-51页 |
| 3.6 DGLs-RVG29-FRET纳米器件应用于细胞内的激活型caspase-3检测 | 第51-52页 |
| 3.7 DGLs-RVG29-FRET纳米器件的离体组织分布 | 第52-53页 |
| 3.8 体内caspase-3激活模型的建立 | 第53-54页 |
| 3.9 DGLs-RVG29-FRET纳米器件应用于脑内的激活型caspase-3检测 | 第54-55页 |
| 3.10 DGLs-RVG29-FRET纳米器件在脑部分布与定位 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 第三章 RVG29修饰脑靶向纳米基因递释系统的构建和表征 | 第58-70页 |
| 1 仪器和材料 | 第59-60页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第59页 |
| 1.2 仪器 | 第59-60页 |
| 1.3 细胞株 | 第60页 |
| 1.4 实验动物 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-63页 |
| 2.1 DGLs-PEG-RVG29的合成 | 第60页 |
| 2.2 DGLs-PEG-RVG29的合成验证 | 第60-61页 |
| 2.2.1 ~1H-NMR | 第60-61页 |
| 2.2.2 巯基反应效率的测定 | 第61页 |
| 2.3 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的制备与表征 | 第61页 |
| 2.3.1 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的制备 | 第61页 |
| 2.3.2 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的粒径表征 | 第61页 |
| 2.3.3 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的电泳实验 | 第61页 |
| 2.4 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒跨BCECs单层转运实验 | 第61-62页 |
| 2.5 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒细胞毒性考察 | 第62页 |
| 2.6 活体成像分析DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的分布 | 第62页 |
| 2.7 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒在脑内的分布 | 第62-63页 |
| 2.8 数据分析 | 第63页 |
| 3 实验结果 | 第63-68页 |
| 3.1 DGLs-PEG-RVG29的合成验证 | 第63页 |
| 3.2 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的表征 | 第63-65页 |
| 3.3 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒跨BCECs单层转运 | 第65页 |
| 3.4 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的安全性考察 | 第65-66页 |
| 3.5 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的体内分布 | 第66-67页 |
| 3.6 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的在脑内的分布 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 5 小结 | 第69-70页 |
| 第四章 RVG29修饰脑靶向纳米基因递释系统用于帕金森病的治疗 | 第70-90页 |
| 1 仪器和材料 | 第71-72页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第71页 |
| 1.2 仪器 | 第71页 |
| 1.3 细胞株 | 第71-72页 |
| 1.4 实验动物 | 第72页 |
| 2 实验方法 | 第72-76页 |
| 2.1 DGLs-PEG-RVG29的合成 | 第72页 |
| 2.2 DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的制备 | 第72页 |
| 2.3 Caspase-3 shRNA编码质粒的筛选 | 第72-73页 |
| 2.4 鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠模型以及给药方案 | 第73页 |
| 2.5 实时定量RT-PCR分析caspase-3 mRNA水平 | 第73-74页 |
| 2.6 Western blot检测激活型caspase-3水平 | 第74页 |
| 2.7 免疫荧光分析激活型caspase-3 | 第74页 |
| 2.8 黑质中酪氨酸羟化酶TH-免疫组化分析 | 第74页 |
| 2.9 体视学计数 | 第74页 |
| 2.10 行为学评价(Open-field test旷场实验) | 第74-75页 |
| 2.11 体内凋亡检测TUNEL分析 | 第75页 |
| 2.12 ELISA测定脑组织中TNF-α水平 | 第75-76页 |
| 2.13 Griess Assay测定脑组织中NO含量 | 第76页 |
| 2.14 数据分析 | 第76页 |
| 3 实验结果 | 第76-88页 |
| 3.1 Caspase-3 shRNA编码质粒的筛选结果 | 第76-77页 |
| 3.2 RT-PCR测定Caspase-3 mRNA水平结果 | 第77页 |
| 3.3 激活型caspase-3蛋白水平Westernblot分析结果 | 第77-78页 |
| 3.4 激活型caspase-3的免疫荧光分析结果 | 第78-82页 |
| 3.5 大鼠体重变化 | 第82-83页 |
| 3.6 行为学评价结果 | 第83-84页 |
| 3.7 TH免疫组化评价结果 | 第84-86页 |
| 3.8 TUNEL检测脑组织中凋亡情况 | 第86-87页 |
| 3.9 TNF-α水平测定 | 第87-88页 |
| 3.10 NO水平测定 | 第88页 |
| 4 讨论 | 第88-89页 |
| 5 小结 | 第89-90页 |
| 第五章 RVG29修饰脑靶向纳米基因-多肽递释系统用于阿尔茨海默病的治疗 | 第90-112页 |
| 1 仪器和材料 | 第92-93页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第92页 |
| 1.2 仪器 | 第92页 |
| 1.3 细胞株 | 第92页 |
| 1.4 实验动物 | 第92-93页 |
| 2 实验方法 | 第93-97页 |
| 2.1 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide的合成 | 第93页 |
| 2.2 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide的合成验证 | 第93页 |
| 2.2.1 ~1H-NMR | 第93页 |
| 2.2.2 巯基反应效率的测定 | 第93页 |
| 2.3 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒的制备 | 第93-94页 |
| 2.4 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒的表征 | 第94页 |
| 2.5 BACE1-AS shRNA编码质粒的构建 | 第94页 |
| 2.6 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒跨BCECs单层转运实验 | 第94页 |
| 2.7 SH-SY5Y细胞对DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒的摄取考察 | 第94页 |
| 2.8 活体成像分析DGLs-PEG-RVG29/DNA纳米粒的分布 | 第94-95页 |
| 2.9 给药方案 | 第95页 |
| 2.10 实时定量RT-PCR分析BACE1 mRNA和BACE1-AS水平 | 第95-96页 |
| 2.11 Western blot检测BACEI蛋白水平 | 第96页 |
| 2.12 BACE1在脑中的免疫荧光染色 | 第96页 |
| 2.13 Aβ淀粉样斑块的硫磺素-S染色 | 第96页 |
| 2.14 磷酸化的tau蛋白(p-tau)免疫荧光染色 | 第96页 |
| 2.15 Morris水迷宫行为学评价 | 第96-97页 |
| 2.16 数据分析 | 第97页 |
| 3 实验结果 | 第97-109页 |
| 3.1 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide的合成验证 | 第97页 |
| 3.2 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒的表征 | 第97-99页 |
| 3.3 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒跨BCECs单层转运 | 第99-100页 |
| 3.4 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒的细胞摄取结果 | 第100-101页 |
| 3.5 DGLs-PEG-RVG29-D-peptide/DNA纳米粒的体内分布 | 第101-103页 |
| 3.6 脑内海马区域BACE1 mRNA和BACE1-AS水平测定结果 | 第103-104页 |
| 3.7 脑内海马区域BACE1蛋白水平Western blot分析结果 | 第104页 |
| 3.8 脑内海马区域的BACE1免疫荧光分析结果 | 第104页 |
| 3.9 Aβ淀粉样斑块的硫磺素-S染色结果 | 第104-106页 |
| 3.10 磷酸化的tau蛋白免疫荧光染色结果 | 第106-107页 |
| 3.11 Morris水迷宫行为学评价结果 | 第107-109页 |
| 4 讨论 | 第109-110页 |
| 5 小结 | 第110-112页 |
| 全文总结 | 第112-115页 |
| 创新性 | 第115-117页 |
| 中英文缩写对照 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-129页 |
| 综述 | 第129-150页 |
| 参考文献 | 第142-150页 |
| 论文 | 第150-151页 |
| 专利 | 第151-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
