| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-31页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 人类博卡病毒的发现和分类 | 第14-16页 |
| 1.3 人类博卡病毒流行病学研究 | 第16-20页 |
| 1.3.1 人博卡病毒在世界范围广泛感染 | 第16-17页 |
| 1.3.2 人博卡病毒与呼吸道病毒共感染 | 第17-18页 |
| 1.3.3 人博卡病毒感染的临床症状 | 第18-20页 |
| 1.4 博卡病毒分子生物学研究进展 | 第20-26页 |
| 1.4.1 人博卡病毒具有独特的末端结构 | 第21-22页 |
| 1.4.2 博卡病毒主要基因的功能研究 | 第22-24页 |
| 1.4.3 博卡病毒感染引起细胞DNA损伤反应 | 第24-26页 |
| 1.5 ALI培养系统简介 | 第26-29页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 人类博卡病毒HBOV1全基因组克隆的构建 | 第31-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第31页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.3 病毒样品获取以及病毒DNA的提取 | 第32页 |
| 2.1.4 PCR扩增 | 第32页 |
| 2.1.5 PCR产物纯化 | 第32页 |
| 2.1.6 pBB载体改造 | 第32-33页 |
| 2.1.7 克隆鉴定及质粒小提和中提 | 第33页 |
| 2.2 结果 | 第33-40页 |
| 2.2.1 HBoV1全基因组克隆的构建策略 | 第33-38页 |
| 2.2.2 HBoV1基因组左侧发夹结构的克隆 | 第38-39页 |
| 2.2.3 HBoV1基因组右侧发夹结构的克隆 | 第39-40页 |
| 2.2.4 HBoV1全基因组的克隆 | 第40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 反向遗传系统生成HBOV1 | 第43-57页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第43-44页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第44页 |
| 3.1.3 脂质体介导的转染 | 第44页 |
| 3.1.4 Southern Blot分析 | 第44-45页 |
| 3.1.5 氯化铯梯度离心及样品收集 | 第45-46页 |
| 3.1.6 Q-PCR检测 | 第46页 |
| 3.1.7 电镜观察 | 第46页 |
| 3.2 结果 | 第46-56页 |
| 3.2.1 HBoV1全基因组克隆可在HEK293复制 | 第46-49页 |
| 3.2.2 HBoV1非结构蛋白影响病毒复制 | 第49-50页 |
| 3.2.3 氯化铯梯度离心纯化制备HBoV1 | 第50-54页 |
| 3.2.4 电镜观察HBoV1病毒粒子 | 第54-56页 |
| 3.3 讨论 | 第56-57页 |
| 第四章 HBOV1感染模型的建立 | 第57-77页 |
| 4.1 材料与方法 | 第57-61页 |
| 4.1.1 细胞系和原代细胞 | 第57-58页 |
| 4.1.2 试剂和仪器 | 第58-59页 |
| 4.1.3 病毒感染 | 第59页 |
| 4.1.4 Q-PCR | 第59-60页 |
| 4.1.5 TEER检测 | 第60页 |
| 4.1.6 间接免疫荧光检测 | 第60-61页 |
| 4.1.7 组织学分析 | 第61页 |
| 4.1.8 Western Blot检测 | 第61页 |
| 4.2 结果 | 第61-76页 |
| 4.2.1 HBoV1感染primary HAE | 第61-64页 |
| 4.2.2 HBoV1感染primary HAE生成子代病毒 | 第64-66页 |
| 4.2.3 HBoV1感染破坏primary HAE紧密连接屏障 | 第66-67页 |
| 4.2.4 HBoV1感染引起primary HAE纤毛脱落 | 第67-70页 |
| 4.2.5 几种常见呼吸道上皮细胞系不支持HBoV1复制 | 第70页 |
| 4.2.6 HBoV1可感染CuFi-HAE | 第70-74页 |
| 4.2.7 HBoV1感染CuFi-HAE导致损伤 | 第74-76页 |
| 4.3 讨论 | 第76-77页 |
| 第五章 HBOV1在PRIMARY HAE中高效复制 | 第77-91页 |
| 5.1 材料与方法 | 第77-80页 |
| 5.1.1 原代细胞 | 第77页 |
| 5.1.2 试剂和仪器 | 第77-78页 |
| 5.1.3 病毒感染 | 第78-79页 |
| 5.1.4 Q-PCR | 第79页 |
| 5.1.5 TEER检测 | 第79页 |
| 5.1.6 间接免疫荧光分析 | 第79-80页 |
| 5.1.7 组织学分析 | 第80页 |
| 5.2 结果 | 第80-90页 |
| 5.2.1 HBoV1高效感染primary HAE并产生子代病毒 | 第80-83页 |
| 5.2.2 极低MOI的HBoV1感染仍可破坏primary HAE | 第83-87页 |
| 5.2.3 HBoV1可从ALI下层感染primary HAE | 第87-90页 |
| 5.3 讨论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 附录Ⅰ HBOV1 SALVADOR分离株全序列(JQ923422) | 第100-103页 |
| 攻读博士学位期间论文发表情况 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
