| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-49页 |
| 1 稻瘟病及稻瘟病菌概述 | 第16-19页 |
| 1.1 稻瘟病的发生规律与防治 | 第17页 |
| 1.2 稻瘟病菌的侵染机制 | 第17-19页 |
| 2 稻瘟病菌分子生物学研究进展 | 第19-34页 |
| 2.1 稻瘟病菌基因组主要特征 | 第19-20页 |
| 2.2 G蛋白信号途径 | 第20-23页 |
| 2.3 cAMP-PKA信号途径 | 第23-24页 |
| 2.4 Pmk1 MAPK信号途径 | 第24-27页 |
| 2.5 Ca~(2+)信号途径 | 第27-28页 |
| 2.6 黑色素合成与膨压形成机制 | 第28-29页 |
| 2.7 海藻糖合成途径 | 第29-30页 |
| 2.8 稻瘟病菌回避植物防御反应的机制 | 第30-32页 |
| 2.9 稻瘟病菌侵染过程中的细胞骨架动力学 | 第32-33页 |
| 2.10 稻瘟病菌抗氧化胁迫机制 | 第33-34页 |
| 3 LIM蛋白研究进展 | 第34-47页 |
| 3.1 LIM结构域的发现与结构 | 第34页 |
| 3.2 LIM蛋白的多样性及分类 | 第34-37页 |
| 3.3 LIM蛋白的主要功能 | 第37-43页 |
| 3.3.1 LHX(LIM homoeodomain)蛋白调控基因表达和决定细胞命运 | 第37-38页 |
| 3.3.2 核LMO蛋白调控基因表达并和肿瘤形成相关 | 第38-39页 |
| 3.3.3 胞质LIM蛋白可以穿梭进入细胞核并调控基因表达 | 第39-41页 |
| 3.3.4 与F-actin和actin细胞骨架蛋白之间的相互作用 | 第41页 |
| 3.3.5 参与胞外基质黏附(cell-ECM adhesion)作用及胞内外信号传导 | 第41-43页 |
| 3.4 真菌LIM蛋白的研究进展 | 第43-47页 |
| 3.4.1 酵母paxillin同源蛋白的功能 | 第43-44页 |
| 3.4.2 棉阿舒囊霉菌(Ashbya gossypii)paxillin类似蛋白的功能 | 第44-45页 |
| 3.4.3 酵母Lrg1和Rga1蛋白的功能 | 第45-47页 |
| 3.4.5 脉孢菌Neurospora Lrg1蛋白的功能 | 第47页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第47-49页 |
| 第二章 材料与方法 | 第49-71页 |
| 1 材料和试剂 | 第49-52页 |
| 1.1 供试菌株、质粒载体及寄主品种 | 第49页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第49页 |
| 1.1.2 质粒载体 | 第49页 |
| 1.1.3 感病寄主品种 | 第49页 |
| 1.2 培养基、抗生素及工具酶使用 | 第49-52页 |
| 1.2.1 培养基及组成成份 | 第49-51页 |
| 1.2.2 转化筛选用抗生素 | 第51-52页 |
| 1.2.3 分子生物学试剂、试剂盒及来源 | 第52页 |
| 2 常规分子生物学实验操作 | 第52-67页 |
| 2.1 PCR | 第52-54页 |
| 2.1.1 常规PCR反应体系 | 第52页 |
| 2.1.2 细菌菌落PCR反应体系 | 第52-53页 |
| 2.1.3 PCR反应程序(LA-Taq/KOD) | 第53页 |
| 2.1.4 PCR产物纯化 | 第53页 |
| 2.1.5 重叠延伸PCR | 第53-54页 |
| 2.2 核酸电泳 | 第54-55页 |
| 2.2.1 DNA电泳 | 第54页 |
| 2.2.2 RNA电泳 | 第54-55页 |
| 2.3 DNA抽提、酶解、回收及连接 | 第55-58页 |
| 2.3.1 大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第55页 |
| 2.3.2 大肠杆菌质粒DNA大量抽提 | 第55-56页 |
| 2.3.3 稻瘟病菌基因组DNA大量抽提 | 第56-57页 |
| 2.3.4 稻瘟病菌基因组DNA小量快速抽提 | 第57页 |
| 2.3.5 DNA酶切反应 | 第57页 |
| 2.3.6 DNA凝胶回收(Axyprep DNA gel extraction kit回收法) | 第57-58页 |
| 2.3.7 酶切DNA片段的去磷酸化反应 | 第58页 |
| 2.3.8 酶切DNA片段的连接反应 | 第58页 |
| 2.4 RNA抽提及qRT-PCR | 第58-60页 |
| 2.4.1 稻瘟病菌总RNA提取(Trizol法) | 第58-59页 |
| 2.4.2 一链cDNA合成 | 第59页 |
| 2.4.3 qRT-PCR反应体系 | 第59-60页 |
| 2.4.4 qRT-PCR反应程序 | 第60页 |
| 2.5 DNA转化 | 第60-63页 |
| 2.5.1 大肠杆菌热激感受态细胞制备及转化 | 第60-61页 |
| 2.5.2 大肠杆菌电击感受态细胞制备及转化 | 第61-62页 |
| 2.5.3 稻瘟病菌菌原生质体制备与转化 | 第62-63页 |
| 2.6 稻瘟病菌基因组DNA Southern杂交(DIG) | 第63-66页 |
| 2.6.1 模板DNA探针标记及杂交液制备 | 第63页 |
| 2.6.2 基因组DNA的消化、电泳及变性 | 第63-64页 |
| 2.6.3 DNA转模 | 第64-65页 |
| 2.6.4 杂交过程 | 第65页 |
| 2.6.5 免疫显色 | 第65-66页 |
| 2.7 酵母双杂交实验 | 第66-67页 |
| 2.7.1 各类贮备液 | 第66页 |
| 2.7.2 酵母双杂转化 | 第66-67页 |
| 3 稻瘟病菌生物学性状测定实验 | 第67-71页 |
| 3.1 稻瘟病菌生长速度测定及菌落形态观察 | 第67页 |
| 3.2 稻瘟病菌产孢培养和产孢量测定 | 第67页 |
| 3.3 稻瘟病菌分生孢子诱导及侧拍实验 | 第67页 |
| 3.4 附着胞形成实验 | 第67-68页 |
| 3.5 稻瘟菌有性生殖实验 | 第68页 |
| 3.6 稻瘟菌单孢分离实验 | 第68页 |
| 3.7 大麦离体接种和水稻喷雾接种 | 第68-69页 |
| 3.8 水稻幼根接种实验 | 第69页 |
| 3.9 洋葱表皮穿透实验 | 第69页 |
| 3.10 稻瘟病菌菌丝、分生孢子和附着胞的GFP观察 | 第69页 |
| 3.11 稻瘟病菌细胞壁敏感性测定 | 第69-71页 |
| 第三章 结果与分析 | 第71-106页 |
| 1 稻瘟病菌四个LIM蛋白编码基因的功能分析 | 第71-96页 |
| 1.1 稻瘟病菌四个LIM蛋白编码基因的鉴定与同源性分析 | 第71-72页 |
| 1.2 稻瘟病菌四个LIM蛋白编码基因的敲除与互补 | 第72-78页 |
| 1.2.1 LIM蛋白编码基因的敲除载体构建 | 第72-74页 |
| 1.2.2 LIM蛋白编码基因的敲除突变体的获得 | 第74-75页 |
| 1.2.3 LIM蛋白编码基因敲除突变体的分子杂交验证 | 第75-77页 |
| 1.2.4 LIM蛋白编码基因互补载体的构建及恢复型菌株的获得 | 第77-78页 |
| 1.3 稻瘟病菌四个LIM蛋白编码基因敲除的表型分析 | 第78-86页 |
| 1.3.1 LIM蛋白编码基因敲除对稻瘟病菌营养生长的影响 | 第78-79页 |
| 1.3.2 LIM蛋白编码基因敲除对稻瘟病菌产孢的影响 | 第79-81页 |
| 1.3.3 LIM蛋白编码基因敲除对分生孢子形态及隔膜分化的影响 | 第81-83页 |
| 1.3.4 LIM蛋白编码基因敲除对附着胞形成的影响 | 第83-85页 |
| 1.3.5 LIM蛋白编码基因敲除对稻瘟病菌致病性的影响 | 第85-86页 |
| 1.4 稻瘟病菌LIM蛋白的亚细胞定位 | 第86-87页 |
| 1.5 MoLrg1和MoPax1蛋白结构域功能分析 | 第87-90页 |
| 1.5.1 结构域缺失载体的构建及转化 | 第87-88页 |
| 1.5.2 MoLrg1蛋白结构域功能分析 | 第88-89页 |
| 1.5.3 MoPax1蛋白结构域功能分析 | 第89-90页 |
| 1.6 稻瘟病菌MoLdb1和LIM蛋白的互作关系 | 第90-94页 |
| 1.6.1 酵母双杂鉴定MoLdb1与四个LIM蛋白之间的互作 | 第90-91页 |
| 1.6.2 稻瘟病菌MoLDB1的敲除对四个LIM蛋白表达的影响 | 第91-92页 |
| 1.6.3 MoPAX1、MoLRG1及MoLDB1敲除突变体的表达谱测序分析 | 第92-94页 |
| 1.7 稻瘟病菌MoPax1、MoLrg1及MoRga1互作蛋白检测 | 第94-95页 |
| 1.8 稻瘟病菌其它6个含RhoGAP蛋白的基因敲除及表型初步分析 | 第95-96页 |
| 2 稻瘟病菌Gγ亚基编码基因MGG1生物学功能分析 | 第96-106页 |
| 2.1 Gγ亚基编码基因MGG1序列分析 | 第96页 |
| 2.2 Gγ亚基编码基因MGG1的敲除及互补 | 第96-99页 |
| 2.2.1 MGG1基因敲除载体构建与突变体的获得 | 第96-97页 |
| 2.2.2 MGG1基因敲除的分子杂交验证 | 第97页 |
| 2.2.3 MGG1基因互补载体的构建和恢复型菌株的获得 | 第97-99页 |
| 2.3 Gy亚基编码基因MGG1敲除菌株的表型分析 | 第99-104页 |
| 2.3.1 MGG1基因敲除对稻瘟病菌生长的影响 | 第99-100页 |
| 2.3.2 MGG1基因敲除对稻瘟病菌产孢的影响 | 第100页 |
| 2.3.3 MGG1基因敲除对稻瘟病菌分生孢子萌发的影响 | 第100-101页 |
| 2.3.4 MGG1基因敲除对稻瘟病菌附着胞形成的影响 | 第101-103页 |
| 2.3.5 MGG1基因敲除对稻瘟病菌有性生殖的影响 | 第103页 |
| 2.3.6 MGG1基因敲除对稻瘟病菌致病性的影响 | 第103-104页 |
| 2.4 稻瘟病菌Gγ亚基的细胞定位 | 第104-106页 |
| 第四章 全文总结、讨论与展望 | 第106-112页 |
| 1 全文总结 | 第106-107页 |
| 2 讨论及展望 | 第107-112页 |
| 2.1 LIM蛋白的同源性及一致性分析 | 第107页 |
| 2.2 稻瘟病菌的基因敲除效率 | 第107-108页 |
| 2.3 突变体△mopax1和△molrg1的表型互补 | 第108页 |
| 2.4 稻瘟病菌MoPax1及其同源蛋白功能比较 | 第108-110页 |
| 2.5 Lrg1和Rga1蛋白功能比较 | 第110-111页 |
| 2.6 MGG1插入失活与敲除突变分析 | 第111页 |
| 2.7 未来研究展望 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-126页 |
| 附录1 本文的突变体及野生菌株 | 第126-127页 |
| 附录2 本文的引物信息 | 第127-130页 |
| 附录3 作者简历及在学期间取得的科研成果 | 第130页 |
