| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 英文缩略表(Abbreviations) | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 概述 | 第12页 |
| 1.2 猪瘟的流行病学 | 第12-14页 |
| 1.3 猪瘟病原学 | 第14-16页 |
| 1.4 猪瘟的常规诊断技术 | 第16-17页 |
| 1.4.1 抗原检测 | 第16页 |
| 1.4.2 抗体检测 | 第16-17页 |
| 1.5 单克隆抗体的应用 | 第17-18页 |
| 1.6 杆状病毒系统研究进展 | 第18-21页 |
| 1.6.1 杆状病毒表达载体表达外源基因的研究 | 第18-19页 |
| 1.6.2 杆状病毒作为哺乳动物的基因转移载体的研究 | 第19页 |
| 1.6.3 杆状病毒作为哺乳动物转移载体在疫苗中的应用 | 第19-21页 |
| 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 猪瘟病毒E2蛋白的表达 | 第22-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 细胞、质粒、菌株 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.4 常用抗生素配方 | 第24页 |
| 2.1.5 缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 DNA片段的纯化回收 | 第25页 |
| 2.2.2 回收产物的连接与转化 | 第25-26页 |
| 2.2.3 小量提取质粒 | 第26页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| 2.2.5 Western blot | 第27-28页 |
| 2.3 pFBD-3HE2/pFBD-3E2重组转移载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.3.1 目的基因的获得 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组转移质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 重组质粒的转座 | 第30页 |
| 2.3.4 重组杆粒的分离 | 第30-31页 |
| 2.3.5 目的基因的杆状病毒表达 | 第31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.4.1 pFBD-3HE2与pFBD-3E2转移载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.4.2 重组杆状病毒vBac-3HE2和vBac-3E2的获得 | 第32-33页 |
| 2.4.3 重组杆状病毒vBac-3HE2和vBac-3E2表达外源蛋白的检测 | 第33-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 2.5.1 杆状病毒表达系统化 | 第35-36页 |
| 2.5.2 重组杆状病毒的的构建 | 第36页 |
| 2.6 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 猪瘟E2蛋白单克隆抗体的制备 | 第37-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 实验动物,材料和试剂 | 第37页 |
| 3.1.2 培养基和主要试剂的配制 | 第37页 |
| 3.1.3 ELISA相关溶液的配制 | 第37页 |
| 3.1.4 腹水纯化用试剂 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 抗原制备 | 第38页 |
| 3.2.2 动物免疫 | 第38页 |
| 3.2.3 间接ELISA方法 | 第38-39页 |
| 3.2.4 骨髓瘤细胞的制备 | 第39页 |
| 3.2.5 免疫脾细胞的制备 | 第39页 |
| 3.2.6 细胞融合 | 第39-40页 |
| 3.2.7 阳性细胞株的筛选与克隆 | 第40页 |
| 3.2.8 杂交瘤细胞冻存和复苏 | 第40-41页 |
| 3.2.9 单克隆抗体的大量制备 | 第41页 |
| 3.2.10 单克隆抗体的效价鉴定 | 第41页 |
| 3.2.11 单克隆抗体的亚类检测 | 第41页 |
| 3.2.12 单克隆抗体的间接免疫荧光检测 | 第41页 |
| 3.2.13 单克隆抗体的Western blot检测 | 第41页 |
| 3.2.14 单克隆抗体的纯化 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 清的效价检测 | 第42页 |
| 3.3.2 最佳抗原包被浓度的确定 | 第42-43页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞株的筛选与建立 | 第43页 |
| 3.3.4 腹水效价检测 | 第43-44页 |
| 3.3.5 抗体亚类鉴定 | 第44页 |
| 3.3.6 Western blot检测单克隆抗体的活性 | 第44页 |
| 3.3.7 IFA检测结果 | 第44-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 3.4.1 细胞融合 | 第46页 |
| 3.4.2 杂交瘤细胞的筛选与克隆 | 第46-47页 |
| 3.4.3 单克隆抗体的验证 | 第47页 |
| 3.5 小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
