| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-40页 |
| 1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第15-19页 |
| 1.1 稻瘟病概况 | 第15页 |
| 1.2 稻瘟病菌的生活史 | 第15-16页 |
| 1.3 稻瘟病菌在寄主叶片的侵染循环 | 第16-19页 |
| 1.3.1 分生孢子萌发 | 第17页 |
| 1.3.2 芽管形成 | 第17页 |
| 1.3.3 附着胞的形成及发育 | 第17-18页 |
| 1.3.4 侵染栓形成和侵入 | 第18页 |
| 1.3.5 产孢与再侵染 | 第18-19页 |
| 1.4 稻瘟病菌的根部侵染过程 | 第19页 |
| 1.5 稻瘟病菌致病性及生理小种 | 第19页 |
| 2 真核细胞中的转录因子 | 第19-28页 |
| 2.1 转录因子概况 | 第20-21页 |
| 2.2 转录因子功能域 | 第21-22页 |
| 2.3 转录因子家族 | 第22-27页 |
| 2.3.1 碱性亮氨酸拉链类转录因子 | 第23页 |
| 2.3.2 碱性螺旋-环-螺旋类转录因子 | 第23-24页 |
| 2.3.3 HMG类转录因子 | 第24-25页 |
| 2.3.4 同源结构域类转录因子 | 第25-26页 |
| 2.3.5 锌指蛋白类转录因子 | 第26-27页 |
| 2.4 转录因子一般研究策略 | 第27-28页 |
| 3 基因敲除方法 | 第28-38页 |
| 3.1 基因敲除概述 | 第28-29页 |
| 3.2 基因敲除方法 | 第29-38页 |
| 3.2.1 基因的同源重组 | 第29-32页 |
| 3.2.2 RNAi | 第32-33页 |
| 3.2.3 锌指核酸酶技术 | 第33-35页 |
| 3.2.4 TALEN技术 | 第35-36页 |
| 3.2.5 核酸内切酶Cas | 第36-38页 |
| 4 选题意义与实验技术 | 第38-40页 |
| 4.1 选题意义 | 第38页 |
| 4.2 实验技术 | 第38-40页 |
| 4.2.1 实验技术流程 | 第38-39页 |
| 4.2.2 实验技术创新点 | 第39-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-51页 |
| 1 试验材料 | 第40-43页 |
| 1.1 试验菌株 | 第40页 |
| 1.2 供试植物 | 第40页 |
| 1.3 质粒载体 | 第40页 |
| 1.4 试剂 | 第40-41页 |
| 1.5 仪器 | 第41页 |
| 1.6 培养基配制 | 第41-43页 |
| 1.6.1 稻瘟病菌培养基 | 第41-43页 |
| 1.6.2 农杆菌诱导培养基(Agrobacterium tumefaciens Induced Medium,AIM) | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-51页 |
| 2.1 PCR | 第43-45页 |
| 2.1.1 常规PCR | 第43-44页 |
| 2.1.2 实时荧光定量PCR | 第44页 |
| 2.1.3 用于转化子的PCR验证 | 第44-45页 |
| 2.2 DNA琼脂糖凝胶电泳分析 | 第45-46页 |
| 2.3 遗传转化 | 第46-47页 |
| 2.3.1 农杆菌的冻融法转化 | 第46-47页 |
| 2.3.1.1 农杆菌AGL1感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 2.3.1.2 农杆菌AGL1感受态细胞的转化 | 第46-47页 |
| 2.3.2 稻瘟病菌的T-DNA转化 | 第47页 |
| 2.4 基因组DNA操作 | 第47-49页 |
| 2.4.1 稻瘟病菌基因组DNA的小量提取 | 第47-48页 |
| 2.4.2 CTAB法提取稻瘟病菌基因组DNA | 第48-49页 |
| 2.5 稻瘟病菌生物学及侵染过程病理学观察 | 第49-51页 |
| 2.5.1 菌株的保存与培养 | 第49页 |
| 2.5.1.1 菌株的保存 | 第49页 |
| 2.5.1.2 菌株的培养 | 第49页 |
| 2.5.2 稻瘟病菌的表型观察 | 第49-51页 |
| 2.5.2.1 生长速率的测定 | 第49页 |
| 2.5.2.2 产孢量的测定 | 第49-50页 |
| 2.5.2.3 孢子萌发率的测定 | 第50页 |
| 2.5.2.4 孢子的附着胞形成率 | 第50页 |
| 2.5.2.5 大麦离体接种测致病性 | 第50-51页 |
| 第三章 转录因子基因敲除 | 第51-64页 |
| 1 ATMT转化和GFP荧光筛选 | 第51-54页 |
| 2 基因敲除突变体的再次验证 | 第54-62页 |
| 2.1 bHLH转录因子的基因敲除结果 | 第55-56页 |
| 2.2 bZIP转录因子的基因敲除结果 | 第56页 |
| 2.3 HMG转录因子的基因敲除结果 | 第56-57页 |
| 2.4 HD转录因子的基因敲除结果 | 第57-58页 |
| 2.5 锌指蛋白转录因子的基因敲除结果 | 第58-62页 |
| 2.5.1 DHHC锌指蛋白转录因子的基因敲除结果 | 第58页 |
| 2.5.2 CCHC锌指蛋白转录因子的基因敲除结果 | 第58-59页 |
| 2.5.3 C2H2锌指蛋白转录因子基因敲除 | 第59-60页 |
| 2.5.4 Zn2Cys6锌指蛋白转录因子基因敲除 | 第60-62页 |
| 2.6 不同类型结构域转录因子的敲除效率分析 | 第62页 |
| 3 Real time PCR检测插入片段拷贝数 | 第62-64页 |
| 第四章 转录因子基因敲除结果与分析 | 第64-98页 |
| 1 bHLH转录因子基因 | 第64-66页 |
| 1.1 菌落生长特性 | 第64页 |
| 1.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第64-65页 |
| 1.3 致病性 | 第65-66页 |
| 2 bZIP转录因子基因 | 第66-69页 |
| 2.1 菌落生长特性 | 第66-67页 |
| 2.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第67-68页 |
| 2.3 致病性 | 第68-69页 |
| 3 HMG转录因子基因 | 第69-73页 |
| 3.1 菌落生长特性 | 第69-71页 |
| 3.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第71-72页 |
| 3.3 致病性 | 第72-73页 |
| 4 HD转录因子基因 | 第73-76页 |
| 4.1 菌落生长特征 | 第74页 |
| 4.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第74-75页 |
| 4.3 致病性 | 第75-76页 |
| 5 锌指蛋白转录因子基因 | 第76-96页 |
| 5.1 DHHC锌指转录因子基因 | 第76-78页 |
| 5.1.1 菌落生长特性 | 第76-77页 |
| 5.1.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第77页 |
| 5.1.3 致病性 | 第77-78页 |
| 5.2 CCHC锌指转录因子基因 | 第78-80页 |
| 5.2.1 菌落生长特性 | 第79页 |
| 5.2.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第79-80页 |
| 5.2.3 致病性 | 第80页 |
| 5.3 C2H2锌指转录因子基因 | 第80-88页 |
| 5.3.1 菌落生长特性 | 第81-84页 |
| 5.3.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第84-86页 |
| 5.3.3 致病性 | 第86-88页 |
| 5.4 Zn2Cys6锌指转录因子基因 | 第88-96页 |
| 5.4.1 菌落生长特性 | 第89-92页 |
| 5.4.2 生长速率、产孢量、孢子萌发率、附着胞形成率 | 第92-94页 |
| 5.4.3 致病性 | 第94-96页 |
| 6 讨论 | 第96-98页 |
| 6.1 小结 | 第96页 |
| 6.2 后期工作 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-105页 |
| 附录 | 第105-115页 |
