| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-20页 |
| 1.1 CYP4F2基本概述 | 第13页 |
| 1.2 CYP4F2影响高血压的流行病学研究 | 第13-15页 |
| 1.3 AA的代谢途径概述 | 第15-17页 |
| 1.3.1 AA概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 20-HETE的生成 | 第16页 |
| 1.3.3 20-HETE功能概述 | 第16-17页 |
| 1.4 斑马鱼模型的应用概述 | 第17-18页 |
| 1.4.1 斑马鱼简介 | 第17-18页 |
| 1.4.2 斑马鱼模型在心血管疾病研究中的应用 | 第18页 |
| 1.5 本课题的研究意义和主要内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 本课题的研究意义 | 第18-19页 |
| 1.5.2 本课题的研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 CYP4F2真核荧光表达载体的构建 | 第20-40页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.2.1 主要实验仪器和耗材 | 第20-21页 |
| 2.2.2 细胞、、菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.4 溶液和培养基 | 第22-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.3.1 HepG2细胞的复苏 | 第24页 |
| 2.3.2 HepG2细胞传代培养 | 第24页 |
| 2.3.3 HepG2细胞冻存 | 第24-25页 |
| 2.3.4 HepG2细胞总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.3.5 总RNA逆转录 | 第26-27页 |
| 2.3.6 CYP4F2序列的PCR扩增 | 第27页 |
| 2.3.7 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.8 凝胶回收纯化PCR产物 | 第28-29页 |
| 2.3.9 pAcGFP1-C1真核表达质粒的扩增 | 第29-31页 |
| 2.3.10 质粒和CYP4F2片段的双酶切 | 第31-32页 |
| 2.3.11 酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.12 回收纯化酶切产物 | 第32页 |
| 2.3.13 CYP4F2片段与质粒的连接 | 第32页 |
| 2.3.14 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.3.15 连接产物的转化 | 第32页 |
| 2.3.16 阳性菌落的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.17 重组真核表达载体的提取 | 第33页 |
| 2.3.18 重组真核表达载体的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.19 琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切产物 | 第34页 |
| 2.3.20 重组真核表达载体上CYP4F2序列的测序鉴定 | 第34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2.4.1 总RNA的提取 | 第34页 |
| 2.4.2 CYP4F2序列的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.4.3 阳性菌落的PCR鉴定 | 第35页 |
| 2.4.4 重组真核表达载体/CYP4F2的酶切和测序鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.5 重组真核表达载体的测序鉴定 | 第36-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 cdh5启动子调控的CYP4F2真核荧光表达载体的构建 | 第40-58页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-44页 |
| 3.2.1 主要实验仪器和耗材 | 第40-41页 |
| 3.2.2 细胞、、菌株和质粒 | 第41-42页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.4 溶液和培养基 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-53页 |
| 3.3.1 斑马鱼基因组提取 | 第44-45页 |
| 3.3.2 cdh5启动子目的片段的扩增 | 第45-46页 |
| 3.3.3 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.4 凝胶回收纯化PCR产物 | 第47-48页 |
| 3.3.5 pAcGFP1-C1-CYP4F2真核表达质粒的扩增 | 第48-50页 |
| 3.3.6 pAeGFP1-C1-CYP4F2质粒和cdh5目的片段的酶切 | 第50页 |
| 3.3.7 酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第50页 |
| 3.3.8 回收纯化酶切产物 | 第50-51页 |
| 3.3.9 cdh5片段与质粒的连接 | 第51页 |
| 3.3.10 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 3.3.11 连接产物的转化 | 第51页 |
| 3.3.12 阳性菌落的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.13 重组真核表达载体的提取 | 第52页 |
| 3.3.14 重组真核表达载体的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.15 琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切产物 | 第53页 |
| 3.3.16 重组真核表达载体上cdh5序列的测序鉴定 | 第53页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第53-56页 |
| 3.4.1 斑马鱼基因组的提取 | 第53页 |
| 3.4.2 CYP4F2序列的PCR扩增 | 第53-54页 |
| 3.4.3 阳性菌落的PCR鉴定 | 第54页 |
| 3.4.4 重组真核表达载体/CYP4F2的酶切和测序鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.5 重组真核表达载体的测序鉴定 | 第55-56页 |
| 3.5 小结 | 第56-58页 |
| 第四章 真核荧光表达载体和斑马鱼cdh5启动子调控的真核荧光表达载体的表达及功能研究 | 第58-79页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-60页 |
| 4.2.1 主要实验仪器和耗材 | 第58-59页 |
| 4.2.2 细胞、菌株和质粒 | 第59页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.2.4 溶液 | 第60页 |
| 4.3 技术路线 | 第60-61页 |
| 4.4 实验方法 | 第61-68页 |
| 4.4.1 无内毒素质粒的提取 | 第61-62页 |
| 4.4.2 质粒浓度的测定 | 第62页 |
| 4.4.3 HK-2细胞的培养 | 第62-63页 |
| 4.4.4 EA.hy926的培养 | 第63页 |
| 4.4.5 pAeGFP-CYP4F2真核荧光表达载体转染HK-2细胞 | 第63-64页 |
| 4.4.6 pAcGFP-CYP4F2-cdh5真核荧光表达载体转染HK-2和EA.hy926细胞 | 第64页 |
| 4.4.7 pAeGFP-CYP4F2真核荧光表达载体转染后CYP4F2转录的RT-qPCR鉴定 | 第64-67页 |
| 4.4.8 pAcGFP-CYP4F2-cdh5真核荧光表达载体转染后CYP4F2转录的RT-qPCR鉴定 | 第67页 |
| 4.4.9 CYP4F2蛋白过表达对与高血压相关的细胞因子的影响子 | 第67-68页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第68-77页 |
| 4.5.1 HK-2细胞的培养 | 第68页 |
| 4.5.2 EA.hy926的培养 | 第68-69页 |
| 4.5.3 pAcGFP-CYP4F2真核荧光表达载体转染HK-2细胞 | 第69-71页 |
| 4.5.4 斑马鱼cdh5启动子调控的pAcGFP-CYP4F2-cdh5真核荧光表达载体转染HK-2和EA.hy926细胞 | 第71-75页 |
| 4.5.5 CYP4F2蛋白过表达对与高血压相关的细胞因子的影响 | 第75-77页 |
| 4.6 小结 | 第77-79页 |
| 结论与展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87页 |
