| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 低温与植物生长发育 | 第11-12页 |
| 1.1.1 低温影响种子萌发 | 第11-12页 |
| 1.1.2 低温影响植物花器官分化及发育 | 第12页 |
| 1.2 低温与植物代谢途径 | 第12页 |
| 1.2.1 低温对植物光合作用影响 | 第12页 |
| 1.2.2 低温影响植物呼吸作用 | 第12页 |
| 1.3 低温与细胞结构 | 第12-13页 |
| 1.4 低温与植物体内代谢物质变化 | 第13-14页 |
| 1.4.1 低温对蛋白质活性影响 | 第13页 |
| 1.4.2 低温对激素的影响 | 第13页 |
| 1.4.3 低温与可溶性糖 | 第13-14页 |
| 1.5 低温与基因表达 | 第14-15页 |
| 1.5.1 低温胁迫相关转录因子 | 第14-15页 |
| 1.5.2 肌醇半乳糖苷合成酶与低温胁迫 | 第15页 |
| 1.6 新疆沙冬青特点 | 第15-16页 |
| 1.7 立题依据及目的意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-31页 |
| 2.1 新疆沙冬青肌醇半乳糖苷合成酶基因克隆 | 第17-21页 |
| 2.1.1 AnGolS1 EST片段分离 | 第17-18页 |
| 2.1.2 5'RACE扩增 | 第18-20页 |
| 2.1.3 3'RACE扩增 | 第20-21页 |
| 2.1.4 序列拼接及生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.2 AnGolS1体外酶活性检测 | 第21-25页 |
| 2.2.1 原核表达重组质粒构建 | 第21-23页 |
| 2.2.2 IPTG诱导融合蛋白表达及纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 催化底物反应及HPLC分析 | 第24-25页 |
| 2.3 qRT-PCR分析不同逆境处理下AnGolS1基因表达量 | 第25页 |
| 2.4 低温胁迫下不同组织切片ISH原位杂交 | 第25-28页 |
| 2.4.1 组织切片制备 | 第25-26页 |
| 2.4.2 ISH DIG-labeling probe制备 | 第26-28页 |
| 2.4.3 ISH杂交实验 | 第28页 |
| 2.5 AnGolS1转基因番茄遗传转化体系构建 | 第28-31页 |
| 2.5.1 转基因重组载体构建 | 第28-29页 |
| 2.5.2 转基因幼苗培育 | 第29-30页 |
| 2.5.3 转基因番茄T0代鉴定 | 第30-31页 |
| 2.5.4 转基因番茄T0代培育 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-48页 |
| 3.1 AnGolS1全长克隆 | 第31-36页 |
| 3.1.1 AnGolS1基因5'-UTR区PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3.1.2 AnGolS1基因3'-UTR区PCR扩增 | 第32-33页 |
| 3.1.3 AnGolS1基因全长拼接 | 第33-34页 |
| 3.1.4 生物信息学分析 | 第34-36页 |
| 3.2 AnGolS1体外酶活性分析 | 第36-40页 |
| 3.2.1 pET30a(+)-AnGolS1重组质粒鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.2 AnGolS1融合蛋白表达及纯化电泳检测 | 第37-38页 |
| 3.2.3 体外酶活性检测 | 第38-40页 |
| 3.3 逆境胁迫下AnGolS1基因表达量变化 | 第40-42页 |
| 3.3.1 低温胁迫下幼苗根、茎、叶AnGolS1表达量变化 | 第40页 |
| 3.3.2 干旱胁迫下根、茎、叶AnGolS1表达量变化 | 第40-41页 |
| 3.3.3 盐胁迫下根、茎、叶AnGolS1表达量变化 | 第41-42页 |
| 3.4 AnGolS1基因组织细胞定位 | 第42-44页 |
| 3.4.1 ISH杂交正义及反义探针RNA合成 | 第42-43页 |
| 3.4.2 低温胁迫下幼根切片ISH原位杂交 | 第43页 |
| 3.4.3 低温胁迫下幼茎切片ISH原位杂交 | 第43-44页 |
| 3.4.4 低温胁迫下幼苗叶片切片ISH原位杂交 | 第44页 |
| 3.4.5 低温胁迫下幼苗下胚轴切片ISH原位杂交 | 第44页 |
| 3.5 AnGolS1转基因番茄遗传转化 | 第44-48页 |
| 3.5.1 AnGolS1转基因载体检测 | 第44-46页 |
| 3.5.2 T0代转基因番茄植株阳性鉴定 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 AnGolS1基因的潜在功能 | 第48-49页 |
| 4.2 逆境下AnGolS1基因表达分析 | 第49-50页 |
| 4.3 低温处理下AnGolS1基因定位分析 | 第50页 |
| 4.4 AnGolS1转基因番茄获得 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 图版 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
