| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| 1.1 寒冷气候对猪生产性能的影响 | 第11页 |
| 1.2 动物冷应激的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 寒冷应激的一般概念 | 第11页 |
| 1.2.2 动物对寒冷应激反应的生理机制 | 第11-12页 |
| 1.2.3 寒冷应激对动物机体的影响 | 第12-13页 |
| 1.3 抗寒基因的功能特性和作用机制 | 第13-14页 |
| 1.4 FoxN1基因的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4.1 FoxN1基因的简介 | 第14页 |
| 1.4.2 FoxN1基因的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.4.3 FoxN1基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 启动子区结构特征 | 第16-17页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂及耗材 | 第18页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.5 实验主要药品配制 | 第19-20页 |
| 2.1.6 主要分子生物学软件 | 第20页 |
| 2.1.7 相关生物信息学网站 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-34页 |
| 2.2.1 实验动物的分组与处理 | 第21页 |
| 2.2.2 猪各组织DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 民猪胸腺组织总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.4 民猪FoxN1基因启动子区的克隆测序 | 第22-24页 |
| 2.2.5 民猪FoxN1基因核心启动子定位 | 第24-27页 |
| 2.2.6 SP1基因的CDS区克隆测序 | 第27-29页 |
| 2.2.7 GATA-1 基因的CDS区克隆测序 | 第29-30页 |
| 2.2.8 Western-blot检测 | 第30-32页 |
| 2.2.9 Real-Time PCR 反应 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-50页 |
| 3.1 环境温度的测定 | 第34页 |
| 3.2 民猪FoxN1基因启动子区的克隆测序结果 | 第34-35页 |
| 3.2.1 民猪总DNA的提取 | 第34-35页 |
| 3.2.2 民猪FoxN1基因启动子区扩增结果 | 第35页 |
| 3.3 民猪FoxN1基因核心启动子的定位 | 第35-39页 |
| 3.3.1 启动子缺失表达载体的构建及鉴定结果 | 第35页 |
| 3.3.2 FoxN1基因核心启动子的定位结果 | 第35-39页 |
| 3.4 正调控因子的验证 | 第39-45页 |
| 3.4.1 民猪总RNA的提取 | 第39页 |
| 3.4.2 民猪GATA-1 基因CDS区扩增结果 | 第39-41页 |
| 3.4.3 民猪SP1基因CDS区扩增结果 | 第41页 |
| 3.4.4 pc DNA3.1-SP1和pc DNA3.1-GATA-1 真核表达载体的构建 | 第41页 |
| 3.4.5 pcDNA3.1-SP1、pcDNA3.1-GATA-1 与pcDNA3.1-5'UTR-FoxN1共转染 | 第41-45页 |
| 3.5 Real-Time PCR鉴定冷诱导后FoxN1基因表达变化 | 第45-48页 |
| 3.5.1 标准曲线的建立 | 第45-47页 |
| 3.5.2 FoxN1基因在胸腺组织的表达情况 | 第47-48页 |
| 3.6 Western blot鉴定冷诱导后FoxN1蛋白表达变化 | 第48-50页 |
| 3.6.1 BSA标准曲线样品的蛋白质浓度 | 第48页 |
| 3.6.2 FoxN1蛋白在胸腺组织中的表达情况 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 猪FoxN1基因启动子区域生物信息学分析 | 第50页 |
| 4.2 猪FoxN1基因启动子活性分析 | 第50-51页 |
| 4.3 FoxN1基因核心启动子活性分析 | 第51页 |
| 4.4 民猪与长白猪抗寒性状分析 | 第51-52页 |
| 4.5 冷应激后猪FoxN1基因在胸腺组织中的表达分析 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
