| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 选题背景及意义 | 第12-14页 |
| 1.1.1 G蛋白偶联受体研究进展及意义 | 第12-13页 |
| 1.1.2 趋化因子稳定性和折叠机理研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 趋化因子CCL11与受体CCR3简介 | 第14-16页 |
| 1.2.1 趋化因子CCL11简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 趋化因子受体CCR3简介 | 第15-16页 |
| 1.3 G蛋白偶联受体结晶学发展 | 第16-25页 |
| 1.3.1 G蛋白偶联受体表达体系的发展 | 第17-18页 |
| 1.3.2 表面活性剂在G蛋白偶联受体增溶和纯化中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3.3 适于晶体生长的G蛋白偶联受体结构的改造 | 第19-21页 |
| 1.3.4 G蛋白偶联受体结晶方法的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.5 G蛋白偶联受体结构解析方法研究进展 | 第22-25页 |
| 1.4 论文的研究内容与特色 | 第25-26页 |
| 第二章 趋化因子CCL11结构稳定性和折叠机理的探究 | 第26-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 趋化因子CCL11突变体的构建 | 第26页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验主要仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 趋化因子CCL11突变体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.2 趋化因子CCL11及其突变体的表达 | 第28页 |
| 2.2.3 趋化因子CCL11及其突变体二级结构的测定 | 第28页 |
| 2.2.4 趋化因子CCL11及突变体的化学平衡热力学 | 第28-29页 |
| 2.2.5 趋化因子CCL11的温度变性热力学 | 第29-30页 |
| 2.2.6 趋化因子CCL11的折叠和去折叠动力学 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-41页 |
| 2.3.1 趋化因子CCL11突变体的构建 | 第31页 |
| 2.3.2 趋化因子CCL11及突变体的表达与二级结构测定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 趋化因子CCL11及突变体在盐酸胍中平衡滴定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 趋化因子CCL11温度变性热力学 | 第33-35页 |
| 2.3.5 趋化因子CCL11折叠与去折叠动力学 | 第35-37页 |
| 2.3.6 讨论 | 第37-41页 |
| 第三章 趋化因子受体CCR3原核表达体系构建 | 第41-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-44页 |
| 3.1.1 模板 | 第41页 |
| 3.1.2 引物 | 第41-42页 |
| 3.1.3 质粒和菌种。 | 第42页 |
| 3.1.4 主要的酶类及分子量标准 | 第42页 |
| 3.1.5 主要试剂盒 | 第42页 |
| 3.1.6 主要试剂和溶液配制 | 第42-44页 |
| 3.1.7 实验仪器 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 引物稀释 | 第44-45页 |
| 3.2.2 CCR3基因克隆 | 第45页 |
| 3.2.3 质粒的制备 | 第45页 |
| 3.2.4 目的片段和空载质粒的双酶切 | 第45-46页 |
| 3.2.5 酶切产物的连接转化 | 第46页 |
| 3.2.6 阳性克隆的验证 | 第46-47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 3.3.1 基因PCR克隆 | 第47页 |
| 3.3.2 目的片段和空载质粒的双酶切 | 第47-48页 |
| 3.3.3 阳性克隆菌落验证 | 第48页 |
| 3.3.4 表达质粒的构建形式 | 第48-49页 |
| 3.3.5 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 不同融合标签对CCR3在大肠杆菌中表达的影响 | 第51-65页 |
| 4.1 实验材料及仪器 | 第51-54页 |
| 4.1.1 不同融合标签的表达质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 主要抗体及分子量标准和试剂盒 | 第51页 |
| 4.1.3 主要试剂和溶液配制 | 第51-53页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 MBP-CCR3融合蛋白表达及酶切验证 | 第54页 |
| 4.2.2 MBP-CCR3与CCL11复合物的分离 | 第54页 |
| 4.2.3 不同融合标签表达条件优化 | 第54-55页 |
| 4.2.4 GST-CCR3融合蛋白表达位置验证 | 第55-56页 |
| 4.2.5 GST-CCR3融合蛋白聚集状态验证 | 第56页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第56-65页 |
| 4.3.1 MBP-CCR3融合蛋白表达及酶切验证 | 第56-57页 |
| 4.3.2 MBP-CCR3与CCL11复合物的分离 | 第57-58页 |
| 4.3.3 SUMO3-CCR3和GST-CCR3融合蛋白表达条件优化 | 第58-60页 |
| 4.3.4 GST-CCR3融合蛋白表达位置验证 | 第60-61页 |
| 4.3.5 GST-CCR3融合蛋白聚集状态验证 | 第61-63页 |
| 4.3.6 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 趋化因子受体CCR3与CCL11复合物结晶条件筛选 | 第65-74页 |
| 5.1 实验材料及仪器 | 第65-67页 |
| 5.1.1 趋化因子受体CCR3的制备 | 第65页 |
| 5.1.2 主要试剂与溶液 | 第65页 |
| 5.1.3 主要溶液配制 | 第65-66页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第66-67页 |
| 5.2 实验方法 | 第67-69页 |
| 5.2.1 趋化因子受体CCR3的表达与纯化 | 第67-68页 |
| 5.2.2 趋化因子受体CCR3单一组分的分离 | 第68页 |
| 5.2.3 趋化因子受体CCR3与CCL11复合物的分离 | 第68页 |
| 5.2.4 趋化因子受体CCR3与CCL11复合物及配体CCL11结晶条件的筛选 | 第68-69页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第69-74页 |
| 5.3.1 趋化因子受体CCR3的制备 | 第69页 |
| 5.3.2 趋化因子受体CCR3单一组分的分离 | 第69-70页 |
| 5.3.3 趋化因子受体CCR3与CCL11复合物的分离 | 第70-71页 |
| 5.3.4 CCR3与CCL11复合物及配体CCL11高通量结晶条件筛选 | 第71-72页 |
| 5.3.5 讨论 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
