| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 本文常用英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-32页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 金纳米颗粒概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 金纳米颗粒的制备 | 第16-17页 |
| 1.2.2 金纳米颗粒的性质 | 第17-18页 |
| 1.2.3 金纳米颗粒的修饰 | 第18页 |
| 1.3 基于金纳米颗粒的荧光核酸探针用于细胞内传感 | 第18-30页 |
| 1.3.1 基于金纳米颗粒的荧光核酸探针用于细胞内传感的基础 | 第19-21页 |
| 1.3.2 用于细胞内传感的基于金纳米颗粒的荧光核酸探针 | 第21-30页 |
| 1.4 细胞内生物传感的现状和展望 | 第30页 |
| 1.5 本论文的工作设想 | 第30-32页 |
| 第2章 FRET nanoflares探针用于活细胞内肿瘤相关mRNA检测 | 第32-49页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 实验部分 | 第32-38页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第32-34页 |
| 2.2.2 缓冲溶液的制备 | 第34页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第34-35页 |
| 2.2.4 探针的制备与表征 | 第35-36页 |
| 2.2.5 金纳米颗粒表面负载的DNA双链数量的确定 | 第36页 |
| 2.2.6 体外标准工作曲线的绘制 | 第36页 |
| 2.2.7 核酶和谷胱甘肽影响考察 | 第36-37页 |
| 2.2.8 荧光共聚焦成像 | 第37页 |
| 2.2.9 HepG2细胞和L02细胞对探针的内吞考察 | 第37页 |
| 2.2.10 细胞TEM成像 | 第37页 |
| 2.2.11 实时荧光定量PCR实验 | 第37-38页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第38-48页 |
| 2.3.1 FRET nanoflares设计原理 | 第38页 |
| 2.3.2 FRET nanoflares的合成与表征 | 第38-40页 |
| 2.3.3 FRET nanoflares的体外响应 | 第40-41页 |
| 2.3.4 单标型nanoflares与FRET nanoflares抗干扰能力比较 | 第41-43页 |
| 2.3.5 FRET nanoflares在细胞中的定位及细胞摄取研究 | 第43-44页 |
| 2.3.6 细胞内特异性考察 | 第44-45页 |
| 2.3.7 观察时间优化 | 第45-46页 |
| 2.3.8 FRET nanoflares在细胞内对TK1 mRNA响应能力的考察 | 第46-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-49页 |
| 第3章 基于aptamer的FRET nanoflares探针用于细胞内钾离子的检测成像 | 第49-64页 |
| 3.1 前言 | 第49页 |
| 3.2 实验部分 | 第49-55页 |
| 3.2.1 试剂与仪器 | 第49-51页 |
| 3.2.2 缓冲溶液的制备 | 第51-52页 |
| 3.2.3 细胞培养 | 第52页 |
| 3.2.4 探针的制备与表征 | 第52-53页 |
| 3.2.5 金纳米颗粒表面负载的DNA双链数量的确定 | 第53页 |
| 3.2.6 体外标准工作曲线的绘制 | 第53-54页 |
| 3.2.7 G-quadruplex结构的表征 | 第54页 |
| 3.2.8 稳定性考察 | 第54页 |
| 3.2.9 探针的细胞毒性考察 | 第54页 |
| 3.2.10 荧光共聚焦成像 | 第54-55页 |
| 3.2.11 SMMC-7721细胞对aptamer FRET nanoflares探针和对照探针的内吞考察 | 第55页 |
| 3.2.12 流式分析 | 第55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-63页 |
| 3.3.1 实验原理 | 第55-56页 |
| 3.3.2 aptamer FRET nanoflares的合成与表征 | 第56-57页 |
| 3.3.3 aptamer FRET nanoflares的体外响应 | 第57-58页 |
| 3.3.4 特异性考察 | 第58-59页 |
| 3.3.5 稳定性考察 | 第59-60页 |
| 3.3.6 细胞毒性考察 | 第60页 |
| 3.3.7 细胞内K~+检测 | 第60-63页 |
| 3.4 小结 | 第63-64页 |
| 第4章 基于金纳米颗粒和核酸适配体核酶的荧光探针用于细胞内ATP的放大检测 | 第64-80页 |
| 4.1 前言 | 第64-65页 |
| 4.2 实验部分 | 第65-70页 |
| 4.2.1 试剂与仪器 | 第65-66页 |
| 4.2.2 缓冲溶液的制备 | 第66-67页 |
| 4.2.3 细胞培养 | 第67页 |
| 4.2.4 探针的制备与表征 | 第67-68页 |
| 4.2.5 体外检测 | 第68页 |
| 4.2.6 选择性考察 | 第68页 |
| 4.2.7 凝胶电泳实验 | 第68-69页 |
| 4.2.8 稳定性考察 | 第69页 |
| 4.2.9 探针的细胞毒性考察 | 第69页 |
| 4.2.10 细胞TEM成像 | 第69页 |
| 4.2.11 荧光共聚焦成像 | 第69-70页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第70-79页 |
| 4.3.1 基于金纳米颗粒和aptazyme的荧光探针的设计原理 | 第70页 |
| 4.3.2 探针的合成与表征 | 第70-71页 |
| 4.3.3 条件优化 | 第71-73页 |
| 4.3.4 aptazyme-AuNPs探针信号放大作用的验证 | 第73-75页 |
| 4.3.5 aptazyme-AuNPs探针对ATP的体外检测 | 第75-76页 |
| 4.3.6 细胞毒性考察 | 第76-77页 |
| 4.3.7 稳定性考察 | 第77页 |
| 4.3.8 aptazyme-AuNPs探针在细胞中的定位研究 | 第77-78页 |
| 4.3.9 aptazyme-AuNPs探针在细胞内对ATP的检测 | 第78-79页 |
| 4.4 小结 | 第79-80页 |
| 第5章 基于金纳米颗粒和发卡封闭型脱氧核酶的荧光探针用于细胞内miRNA的放大检测 | 第80-96页 |
| 5.1 前言 | 第80-81页 |
| 5.2 实验部分 | 第81-86页 |
| 5.2.1 试剂与仪器 | 第81-82页 |
| 5.2.2 缓冲溶液的制备 | 第82-83页 |
| 5.2.3 细胞培养 | 第83页 |
| 5.2.4 探针的制备与表征 | 第83-84页 |
| 5.2.5 凝胶电泳实验 | 第84页 |
| 5.2.6 荧光实验 | 第84-85页 |
| 5.2.7 稳定性考察 | 第85页 |
| 5.2.8 探针的细胞毒性考察 | 第85页 |
| 5.2.9 细胞TEM成像 | 第85页 |
| 5.2.10 荧光共聚焦成像 | 第85-86页 |
| 5.2.11 流式分析 | 第86页 |
| 5.2.12 实时荧光定量PCR实验 | 第86页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第86-95页 |
| 5.3.1 实验原理 | 第86-87页 |
| 5.3.2 可行性验证 | 第87-88页 |
| 5.3.3 探针的合成与表征 | 第88-89页 |
| 5.3.4 多重信号放大作用的验证及灵敏度考察 | 第89-90页 |
| 5.3.5 选择性考察 | 第90页 |
| 5.3.6 细胞毒性考察 | 第90-91页 |
| 5.3.7 稳定性考察 | 第91-92页 |
| 5.3.8 探针在细胞内的定位 | 第92页 |
| 5.3.9 探针在细胞内对目标miRNA检测的可行性考察 | 第92-93页 |
| 5.3.10 探针在细胞内的荧光特异性考察 | 第93-94页 |
| 5.3.11 探针在不同细胞内对miRNA-141检测 | 第94-95页 |
| 5.4 小结 | 第95-96页 |
| 结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-115页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
