| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-22页 |
| 1.1 弓形虫病概述 | 第17-18页 |
| 1.1.1 弓形虫与弓形虫病 | 第17页 |
| 1.1.2 弓形虫病的危害与防治 | 第17页 |
| 1.1.3 弓形虫在科学研究中的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 ROP16研究现状 | 第18-19页 |
| 1.2.1 ROP16简介 | 第18页 |
| 1.2.2 ROP16影响宿主基因表达 | 第18页 |
| 1.2.3 ROP16的其它功能 | 第18-19页 |
| 1.3 CRISPR/CAS9基因敲除技术研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 CRISPR的结构和分类 | 第19页 |
| 1.3.2 CRISPR作用机理 | 第19-20页 |
| 1.3.3 敲除原理 | 第20-21页 |
| 1.3.4 CRISPR应用前景 | 第21-22页 |
| 第二章 磺胺氯吡嗪钠复方对小鼠体内抗弓形虫疗效的观察 | 第22-31页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 小鼠 | 第22页 |
| 2.1.2 弓形虫速殖子 | 第22页 |
| 2.1.3 VERO细胞 | 第22页 |
| 2.1.4 试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 细胞毒性试验 | 第23页 |
| 2.2.2 体外抗虫试验 | 第23页 |
| 2.2.3 体内抗虫试验 | 第23页 |
| 2.2.4 药物效果评价指标 | 第23页 |
| 2.2.5 数据分析 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-29页 |
| 2.3.1 细胞毒性试验 | 第24页 |
| 2.3.2 药物体外抗弓形虫效果 | 第24-26页 |
| 2.3.3 小鼠体内药物抗弓形虫效果 | 第26-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 ROP16缺失株的构建 | 第31-40页 |
| 3.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 实验动物与微生物 | 第31页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 仪器 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 弓形虫RH株的收集及基因组的提取 | 第32页 |
| 3.2.2 gRNA设计 | 第32页 |
| 3.2.3 pSAG1:CAS9::TgU6:sgROP16质粒构建 | 第32页 |
| 3.2.4 同源重组质粒pROP16:DHFR-D的构建 | 第32-34页 |
| 3.2.5 电穿孔转染弓形虫速殖子及缺失弓形虫株的筛选 | 第34页 |
| 3.2.6 基因敲除虫株的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.7 ROP16基因敲除后互补虫株的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.8 Western-blot | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 ROP16基因信息 | 第36页 |
| 3.3.2 目的片段扩增 | 第36-37页 |
| 3.3.3 ROP16基因敲除及互补虫株的PCR鉴定结果 | 第37-38页 |
| 3.3.4 基因敲除后Western-blot结果 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 弓形虫ROP16的表达及其生物学功能研究 | 第40-51页 |
| 4.1 材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验动物与微生物 | 第40页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.3 仪器 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-45页 |
| 4.2.1 ROP16蛋白表达的引物设计 | 第41-42页 |
| 4.2.2 弓形虫RH株的收集及基因组的提取 | 第42页 |
| 4.2.3 目的基因的扩增 | 第42-43页 |
| 4.2.4 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.5 重组质粒在大肠杆菌内的诱导表达 | 第44页 |
| 4.2.6 重组蛋白的复性及纯化 | 第44页 |
| 4.2.7 ROP16免疫原性试验 | 第44页 |
| 4.2.8 ROP16多克隆抗体的制备 | 第44-45页 |
| 4.2.9 弓形虫入侵试验 | 第45页 |
| 4.2.10 ROP16敲除弓形虫感染小鼠后血清细胞因子的检测 | 第45页 |
| 4.2.11 ROP16敲除弓形虫的致死性试验 | 第45页 |
| 4.2.12 数据统计 | 第45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-49页 |
| 4.3.1 ROP16目的片段的扩增 | 第45-46页 |
| 4.3.2 重组质粒的鉴定 | 第46页 |
| 4.3.3 重组质粒在大肠杆菌内的表达 | 第46-47页 |
| 4.3.4 重组蛋白的纯化 | 第47页 |
| 4.3.5 ELISA检测ROP16免疫原性及ROP16多克隆抗体效价 | 第47-48页 |
| 4.3.6 ROP16敲除后对虫株体外入侵能力的影响 | 第48页 |
| 4.3.7 ROP16的缺失株刺激KM小鼠后细胞因子分泌的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.8 ROP16缺失株感染KM小鼠存活时间的影响 | 第49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 SPZ抗弓形虫机理的初步探究 | 第51-56页 |
| 5.1 材料 | 第51页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第51页 |
| 5.1.2 实验药物及试剂 | 第51页 |
| 5.1.3 试验仪器 | 第51页 |
| 5.1.4 弓形虫虫株的复苏和增殖 | 第51页 |
| 5.2 SPZ对ROP16缺失株感染鼠的保护效果 | 第51-52页 |
| 5.3 SPZ处理后的透射电镜观察 | 第52页 |
| 5.3.1 虫体纯化 | 第52页 |
| 5.3.2 虫体的前期处理 | 第52页 |
| 5.3.3 虫体的制片观察 | 第52页 |
| 5.4 SPZ治疗组感染鼠血清的IL-12 分泌情况 | 第52页 |
| 5.5 结果与分析 | 第52-55页 |
| 5.5.1 SPZ对ROP16缺失株感染鼠的保护效果 | 第52-53页 |
| 5.5.2 透射电镜结果 | 第53-54页 |
| 5.5.3 IL-12 表达结果 | 第54-55页 |
| 5.6 讨论 | 第55-56页 |
| 第六章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
