| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-25页 |
| 1 放射生物效应及放射损伤 | 第17-18页 |
| 2 放射防护剂及SOD的应用 | 第18-23页 |
| 2.1 放射防护剂 | 第18-19页 |
| 2.1.1 放射防护作用评价 | 第18-19页 |
| 2.1.2 放射防护剂研究概况 | 第19页 |
| 2.2 SOD的应用 | 第19-23页 |
| 2.2.1 天然SOD的放射防护作用 | 第19-20页 |
| 2.2.2 运用基因敲除和转基因动物模型研究SOD的放射防护作用 | 第20-21页 |
| 2.2.3 SOD非肽模拟物的放射防护作用 | 第21页 |
| 2.2.4 多糖修饰SOD用于放射防护的可行性 | 第21-23页 |
| 3 本课题已有的研究基础 | 第23页 |
| 4 本课题拟解决的问题 | 第23-25页 |
| 第二章 肝素对SOD的化学修饰研究 | 第25-33页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| 1.1 试剂 | 第25页 |
| 1.2 仪器 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-28页 |
| 2.1 SOD活性测定 | 第25-26页 |
| 2.2 酶蛋白自由氨基修饰率的测定 | 第26页 |
| 2.3 HEP-SOD结合物的制备 | 第26-27页 |
| 2.3.1 肝素的活化 | 第26页 |
| 2.3.2 肝素对SOD的修饰 | 第26-27页 |
| 2.4 HEP-SOD的分离 | 第27页 |
| 2.4.1 SOD修饰反应液的预处理 | 第27页 |
| 2.4.2 HEP-SOD的DEAE-Sepharose Fast Flow层析分离 | 第27页 |
| 2.4.3 HEP-SOD的电泳鉴定 | 第27页 |
| 2.5 HEP-SOD分级产品的理化性质 | 第27-28页 |
| 2.5.1 HEP-SOD分级产品肝素与SOD比值测定 | 第27-28页 |
| 2.5.2 HEP-SOD分级产品酶比活比较 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-31页 |
| 3.1 肝素对SOD的修饰 | 第28页 |
| 3.1.1 修饰产物的酶活保持率和自由氨基修饰率 | 第28页 |
| 3.1.2 修饰产物的的电泳鉴定 | 第28页 |
| 3.2 HEP-SOD的分级分离 | 第28-30页 |
| 3.2.1 HEP-SOD的DEAE-Sepharose Fast Flow层析分级结果 | 第28-29页 |
| 3.2.2 HEP-SOD DEAE-Sepharose Fast Flow分级产品的电泳鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3 HEP-SOD分级产品的理化性质 | 第30-31页 |
| 3.3.1 肝素与SOD比值 | 第30页 |
| 3.3.2 HEP-SOD分级产品酶比活比较 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 4.1 肝素对SOD的修饰 | 第31页 |
| 4.2 HEP-SOD的分级分离 | 第31-32页 |
| 5 结论 | 第32-33页 |
| 第三章 甲基季铵化壳聚糖对SOD的化学修饰研究 | 第33-48页 |
| 1 材料 | 第33页 |
| 1.1 试剂 | 第33页 |
| 1.2 仪器 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-36页 |
| 2.1 SOD酶活测定 | 第33页 |
| 2.2 等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2.3 TMC的制备 | 第34页 |
| 2.3.1 壳聚糖的N,N,N-三甲基季铵化 | 第34页 |
| 2.3.2 离子交换转型 | 第34页 |
| 2.3.4 TMC季铵化度的测定 | 第34页 |
| 2.4 TMC对SOD的化学修饰 | 第34-35页 |
| 2.4.1 EDC缩合法制备TMC-SOD结合物 | 第34-35页 |
| 2.4.2 不同修饰反应时间酶活保留率测定 | 第35页 |
| 2.4.3 不同修饰反应时间反应液电泳检测 | 第35页 |
| 2.4.4 修饰反应时间及pH的确定 | 第35页 |
| 2.5 非共价结合作用的考察 | 第35页 |
| 2.6 TMC-SOD的分级分离 | 第35-36页 |
| 2.6.1 SOD修饰反应液的预处理 | 第35页 |
| 2.6.2 TMC-SOD的DEAE-Sepharose Fast Flow层析分离 | 第35-36页 |
| 2.6.3 TMC-SOD的电泳鉴定 | 第36页 |
| 2.7 TMC-SOD分级产品的初步筛选 | 第36页 |
| 2.7.1 TMC-SOD分级产品中TMC与SOD比值测定 | 第36页 |
| 2.7.2 TMC-SOD分级产品酶比活比较 | 第36页 |
| 2.7.3 TMC-SOD分级产品的热稳定性比较 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-44页 |
| 3.1 TMC的制备 | 第36-37页 |
| 3.2 TMC对SOD的化学修饰 | 第37-40页 |
| 3.2.1 不同pH条件下修饰过程中酶活变化情况比较 | 第37页 |
| 3.2.2 修饰反应IEF-PAGE电泳鉴定 | 第37-40页 |
| 3.2.3 SOD修饰反应反应时间及pH的确定 | 第40页 |
| 3.3 非共价结合作用的考察 | 第40-41页 |
| 3.4 TMC-SOD的层析分离 | 第41-42页 |
| 3.4.1 TMC-SOD的DEAE-Sepharose Fast Flow层析分离 | 第41-42页 |
| 3.4.2 TMC-SOD DEAE-Sepharose Fast Flow分级产品的电泳鉴定 | 第42页 |
| 3.5 TMC-SOD分级产品的初步筛选 | 第42-44页 |
| 3.5.1 TMC-SOD分级分离产品中TMC与SOD比值 | 第42-43页 |
| 3.5.2 TMC-SOD分级分离产品酶比活比较 | 第43页 |
| 3.5.3 TMC-SOD分级分离产品的热稳定性比较 | 第43-44页 |
| 3.5.4 TMC-SOD分级产品的初步筛选 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 TMC的制备 | 第44-45页 |
| 4.2 TMC对SOD的修饰 | 第45-46页 |
| 4.3 TMC-SOD的分级分离 | 第46-47页 |
| 4.4 TMC-SOD分级产品的初步筛选 | 第47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 第四章 SOD及其结合物的二级结构分析及构效关系研究 | 第48-64页 |
| 1 材料 | 第48页 |
| 1.1 试剂 | 第48页 |
| 1.2 仪器 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-49页 |
| 2.1 HEP-SOD、TMC-SOD与SOD的FTIR测定 | 第48-49页 |
| 2.1.1 波谱采集 | 第48页 |
| 2.1.2 谱图分析 | 第48-49页 |
| 2.2 80℃保温不同时间后TMC-SOD分级产品与SOD的FTIR测定 | 第49页 |
| 2.2.1 波谱采集 | 第49页 |
| 2.2.2 谱图分析 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-60页 |
| 3.1 SOD和HEP-SOD的FTIR二级结构分析 | 第49-52页 |
| 3.2 TMC-SOD的FTIR二级结构分析 | 第52页 |
| 3.3 80℃保温不同时间后TMC-SOD分级产品与SOD的FTIR二级结构分析 | 第52-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 第五章 肝素-SOD与甲基季铵化壳聚糖-SOD对受照细胞炎症因子表达的影响 | 第64-70页 |
| 1 材料 | 第64页 |
| 1.1 试剂 | 第64页 |
| 1.2 实验细胞 | 第64页 |
| 1.3 仪器 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-66页 |
| 2.1 3T3细胞的培养及传代 | 第64页 |
| 2.2 细胞分组及照射 | 第64-65页 |
| 2.3 细胞因子的测定 | 第65-66页 |
| 2.3.1 TGF-β1的含量测定 | 第65-66页 |
| 2.3.2 IL-1β的含量测定 | 第66页 |
| 2.3.3 结果处理 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-68页 |
| 3.1 各组细胞内TGF-β1的表达水平 | 第66-67页 |
| 3.1.1 TGF-β1标准曲线 | 第66页 |
| 3.1.2 TGF-β1的表达水平 | 第66-67页 |
| 3.2 各组细胞内IL-1β的表达水平 | 第67-68页 |
| 3.2.1 IL-1β标准曲线 | 第67页 |
| 3.2.2 IL-1β的表达水平 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 4.1 放射纤维化及细胞因子的调控作用 | 第68-69页 |
| 4.2 Cu,Zn-SOD对放射引起的纤维化的治疗作用 | 第69-70页 |
| 第六章 肝素-SOD与甲基季铵化-SOD对放射损伤作用的体内试验研究 | 第70-81页 |
| 1 材料 | 第70页 |
| 1.1 试剂 | 第70页 |
| 1.2 实验细胞与动物 | 第70页 |
| 1.3 仪器 | 第70页 |
| 2 方法 | 第70-72页 |
| 2.1 肿瘤接种 | 第70页 |
| 2.2 实验动物分组与处理 | 第70-71页 |
| 2.3 ~(60)Coγ射线照射 | 第71页 |
| 2.4 相关指标测定 | 第71-72页 |
| 2.4.1 外周血白细胞计数 | 第71页 |
| 2.4.2 免疫器官指数测定 | 第71页 |
| 2.4.3 各组瘤重比较 | 第71页 |
| 2.4.4 各组织抑制·OH能力测定 | 第71页 |
| 2.4.5 结果处理 | 第71-72页 |
| 2.5 小鼠脾组织DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-77页 |
| 3.1 外周血白细胞计数 | 第72-73页 |
| 3.2 免疫器官指数 | 第73-74页 |
| 3.3 各组瘤重比较 | 第74页 |
| 3.4 不同组织对·OH抑制能力 | 第74-76页 |
| 3.5 小鼠脾组织DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-81页 |
| 4.1 SOD及其结合物对辐射后免疫系统的作用 | 第77-78页 |
| 4.2 SOD及其结合物对放疗后肿瘤组织的影响 | 第78页 |
| 4.3 电离辐射与ROS | 第78-81页 |
| 总结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第91-92页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第92页 |
