| 目录 | 第3-6页 |
| 致谢 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-30页 |
| 突变体库与功能基因组学 | 第9-12页 |
| 突变体库研究背景 | 第9-11页 |
| 国内外研究现状和发展趋势 | 第11-12页 |
| 突变体库的构建和利用 | 第12-13页 |
| 突变体库的构成 | 第12页 |
| 突变基因克隆与功能研究 | 第12-13页 |
| 失去功能和获得功能突变体筛选 | 第12页 |
| 反向遗传学研究 | 第12-13页 |
| RNAi与基因功能研究 | 第13-15页 |
| 转录因子与WRKY基因家族 | 第15-30页 |
| 转录因子概述 | 第15页 |
| 转录因子的结构与功能 | 第15-21页 |
| DNA结合区 | 第15-18页 |
| 转录调控区 | 第18-20页 |
| 核定位信号区 | 第20页 |
| 寡聚化位点 | 第20-21页 |
| 转录因子的活性调控 | 第21-23页 |
| 转录因子基因的克隆方法 | 第23-25页 |
| WRKY转录因子及其研究进展 | 第25-30页 |
| WRKY蛋白基本特征 | 第25-27页 |
| WRKY基因的生物学角色 | 第27-30页 |
| 第二部分 突变体库的构建和基因克隆 | 第30-47页 |
| Ac／Ds插入突变体库构建 | 第30-32页 |
| 农杆菌转化法构建突变体库 | 第30-32页 |
| 转化质粒结构 | 第30-31页 |
| 农杆菌转染法 | 第31-32页 |
| 突变体筛选与表型分析 | 第32-34页 |
| 插入边端序列扩增 | 第34-41页 |
| 实验材料与仪器 | 第34页 |
| 反式PCR法（Inverse-PCR） | 第34-37页 |
| Inverse-PCR原理 | 第34-35页 |
| 引物设计 | 第35页 |
| 实验步骤 | 第35-37页 |
| Tail-PCR边端序列扩增法 | 第37-39页 |
| Tail-PCR原理 | 第37页 |
| 引物设计 | 第37-38页 |
| 实验步骤 | 第38-39页 |
| Tail-连接PCR法 | 第39-41页 |
| 原理 | 第39-40页 |
| 引物设计 | 第40页 |
| 实验步骤 | 第40页 |
| 实验结果 | 第40-41页 |
| 突变体插入Southern Blot分析 | 第41-43页 |
| 基因组序列分析预测与cDNA克隆 | 第43-47页 |
| Osdd1扩增产物分析 | 第43页 |
| Osdd2扩增产物分析 | 第43-47页 |
| 突变体的验证 | 第45-46页 |
| cDNA克隆 | 第46-47页 |
| 实验方法 | 第46页 |
| 实验结果 | 第46-47页 |
| 第三部分 OsddWRKY序列及功能分析 | 第47-60页 |
| OsddWRKY序列分析 | 第47-51页 |
| 基本情况 | 第47页 |
| WRKYs | 第47-48页 |
| WRKY1 | 第48-49页 |
| OsddWRKY功能域分析 | 第49-51页 |
| OsWRKY启动子功能分析 | 第51-54页 |
| 实验目的 | 第51页 |
| 实验材料与方法 | 第51页 |
| 实验步骤 | 第51-53页 |
| 实验结果 | 第53-54页 |
| OsWRKY干涉载体构建与转基因 | 第54-60页 |
| 研究背景和实验目的 | 第54页 |
| 实验步骤 | 第54-59页 |
| 含WRKY保守域RNAi载体的构建 | 第54-59页 |
| 不含WRKY保守域载体的构建 | 第59页 |
| RNAi载体转化水稻 | 第59页 |
| 实验结果 | 第59-60页 |
| 第四部分 水稻WRKY基因家族分析 | 第60-64页 |
| 可供使用的水稻基因组数据库 | 第60-61页 |
| 国际水稻基因组计划 | 第60页 |
| 中国超级稻测序计划 | 第60页 |
| 公司测序计划 | 第60-61页 |
| 分析方法与策略 | 第61-62页 |
| 分析结果 | 第62页 |
| 水稻与拟南芥WRKY家族比较分析 | 第62-64页 |
| 讨论 | 第64-65页 |
| 下一步研究计划 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-73页 |
| 1． PCR产物回收及测序分析 | 第66-67页 |
| 1．1 PCR产物切胶纯化 | 第66页 |
| 1．2 PCR产物与T—easy Vector连接 | 第66页 |
| 1．3 感受态细胞制备 | 第66页 |
| 1．4 转化 | 第66-67页 |
| 1．5 重组克隆的筛选与鉴定 | 第67页 |
| 1．6 测序反应 | 第67页 |
| 2． Southern杂交分析 | 第67-69页 |
| 2．1 水稻基因组DNA的提取 | 第67-68页 |
| 2．2 基因组DNA的酶切 | 第68页 |
| 2．3 电泳及转膜 | 第68页 |
| 2．4 同位素标记制备探针及探针纯化 | 第68-69页 |
| 2．5 探针纯化 | 第69页 |
| 2．6 杂交 | 第69页 |
| 3． RNA操作 | 第69-71页 |
| 3．1 提取总RNA | 第69页 |
| 3．2 RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第69-70页 |
| 3．3 转膜 | 第70页 |
| 3．4 RT-PCR | 第70-71页 |
| 4． 其它相关操作 | 第71-72页 |
| 4．1 酶切位点平端化 | 第71页 |
| 4．2 末端去磷酸化 | 第71页 |
| 4．3 农杆菌感受态制备和转化 | 第71-72页 |
| 5． 含OsddWRKY基因的基因组序列分析 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |