| 致谢 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 中文摘要 | 第14-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-26页 |
| 第一章 二化螟及其抗药性的研究现状 | 第18-22页 |
| 1 二化螟的发生与危害 | 第18-19页 |
| 2 二化螟抗药性现状 | 第19-20页 |
| 3 二化螟抗药性机理 | 第20页 |
| 4 二化螟抗药性治理 | 第20-21页 |
| 5 展望 | 第21-22页 |
| 第二章 昆虫羧酸酯酶的研究进展 | 第22-26页 |
| 1 昆虫羧酸酯酶基因家族的命名和分类 | 第22-23页 |
| 2 昆虫羧酸酯酶的功能 | 第23-24页 |
| 3 昆虫羧酸酯酶与昆虫抗药性的关系 | 第24-25页 |
| 4 展望 | 第25-26页 |
| 第二部分 研究内容 | 第26-75页 |
| 第三章 二化螟酯酶基因的克隆与序列分析 | 第27-39页 |
| 1 材料与方法 | 第27-33页 |
| 1.1 材料、菌株、载体、试剂 | 第27页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第27-28页 |
| 1.3 总RNA抽提 | 第28-29页 |
| 1.4 cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| 1.5 PCR扩增反应 | 第29-30页 |
| 1.6 PCR产物纯化、回收 | 第30页 |
| 1.7 目的基因与克隆载体连接 | 第30-31页 |
| 1.8 连接产物的转化 | 第31页 |
| 1.9 转化子的筛选和验证 | 第31-32页 |
| 1.10 质粒DNA的抽提 | 第32页 |
| 1.11 二化螟酯酶基因的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2 结果分析 | 第33-38页 |
| 2.1 二化螟酯酶基因CsCaE026的克隆与序列分析 | 第33-35页 |
| 2.2 二化螟酯酶基因CsCaE026的氨基酸序列与发育进化分析 | 第35-38页 |
| 3 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 二化螟酯酶基因的原核表达及其抗体制备 | 第39-48页 |
| 1 材料与方法 | 第39-44页 |
| 1.1 载体、菌株及主要试剂 | 第39页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第39页 |
| 1.3 二化螟酯酶基因重组表达质粒的构建 | 第39-41页 |
| 1.3.1 目的基因的PCR扩增和产物纯化 | 第39-40页 |
| 1.3.2 目的基因及载体pET-32a酶切 | 第40页 |
| 1.3.3 酶切产物纯化 | 第40-41页 |
| 1.3.4 目的基因与载体连接 | 第41页 |
| 1.3.5 连接产物的转化 | 第41页 |
| 1.3.6 重组质粒的筛选和验证 | 第41页 |
| 1.4 CsCaE026基因的原核表达 | 第41-42页 |
| 1.4.1 转化至Rosetta感受态细胞 | 第41页 |
| 1.4.2 CsCaE026基因的诱导表达 | 第41-42页 |
| 1.4.3 蛋白表达形式的鉴定 | 第42页 |
| 1.5 蛋白样品SDS-PAGE检测 | 第42-43页 |
| 1.5.1 SDS-PAGE凝胶配制 | 第42页 |
| 1.5.2 样品处理 | 第42-43页 |
| 1.5.3 上样和电泳 | 第43页 |
| 1.5.4 染色和脱色 | 第43页 |
| 1.6 多克隆抗体制备 | 第43页 |
| 1.7 Western Blot | 第43-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-46页 |
| 2.1 二化螟CsCaE026基因重组表达质粒的构建 | 第44页 |
| 2.2 二化螟CsCaE026基因原核表达及SDS-PAGE | 第44-45页 |
| 2.3 多克隆抗体制备与Western Blot抗体验证 | 第45-46页 |
| 3 小结 | 第46-48页 |
| 第五章 二化螟酯酶基因的时空表达分析 | 第48-57页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第48页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第48页 |
| 1.3 总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第48-49页 |
| 1.3.1 二化螟不同发育阶段总RNA提取 | 第48-49页 |
| 1.3.2 二化螟5龄幼虫不同组织总RNA提取 | 第49页 |
| 1.3.3 二化螟雌雄成虫不同躯体总RNA提取 | 第49页 |
| 1.3.4 cDNA第一条链的合成 | 第49页 |
| 1.4 定量PCR引物的设计 | 第49页 |
| 1.5 荧光定量PCR及定量数据分析 | 第49-50页 |
| 1.6 二化螟酯酶基因CsCaE026蛋白表达的时空分析 | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-55页 |
| 2.1 二化螟酯酶基因CsCaE026表达的时间分布 | 第51-52页 |
| 2.2 二化螟酯酶基因CsCaE026表达的组织分布 | 第52-53页 |
| 2.3 二化螟酯酶基因CsCaE026表达的体躯分布 | 第53-55页 |
| 3 小结 | 第55-57页 |
| 第六章 二化螟酯酶基因的真核表达 | 第57-72页 |
| 1 材料与方法 | 第57-65页 |
| 1.1 载体、菌株及主要试剂 | 第57页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第57-58页 |
| 1.3 二化螟酯酶基因CsCaE026的PCR扩增和纯化 | 第58页 |
| 1.4 供体质粒的构建 | 第58-60页 |
| 1.4.1 目的基因及载体pFastBac-THE酶切 | 第58-59页 |
| 1.4.2 酶切产物纯化 | 第59页 |
| 1.4.3 载体酶切纯化产物的去磷酸化反应 | 第59页 |
| 1.4.4 目的基因与载体连接 | 第59-60页 |
| 1.4.5 连接产物的转化 | 第60页 |
| 1.4.6 供体质粒的筛选和验证 | 第60页 |
| 1.5 重组Bacmid的获得 | 第60-62页 |
| 1.5.1 供体质粒CsCaE026/pFastBac转入DH10Bac感受态细胞 | 第60页 |
| 1.5.2 重组Bacmid筛选和验证 | 第60-61页 |
| 1.5.3 提取重组病毒CsCaE026/Bacmid | 第61-62页 |
| 1.6 昆虫Sf9细胞的转染及表达 | 第62-63页 |
| 1.6.1 昆虫Sf9细胞的培养及转染 | 第62-63页 |
| 1.6.2 P1病毒株的提取 | 第63页 |
| 1.6.3 P1病毒株的扩增 | 第63页 |
| 1.6.4 重组蛋白的表达 | 第63页 |
| 1.7 重组蛋白的提取 | 第63-64页 |
| 1.7.1 收集昆虫细胞 | 第64页 |
| 1.7.2 清洗昆虫细胞 | 第64页 |
| 1.7.3 溶解昆虫细胞 | 第64页 |
| 1.8 蛋白纯化 | 第64-65页 |
| 1.9 蛋白浓缩 | 第65页 |
| 1.10 SDS-PAGE和Western Blot | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| 2.1 供体质粒的构建 | 第65-67页 |
| 2.2 重组病毒Bacmid的构建 | 第67页 |
| 2.3 昆虫Sf9细胞的转染及病毒粒子的扩增 | 第67-69页 |
| 2.4 蛋白的表达 | 第69页 |
| 2.5 蛋白纯化和检测 | 第69-70页 |
| 3 小结 | 第70-72页 |
| 第七章 总结 | 第72-75页 |
| 1 二化螟酯酶基因CsCaE026的克隆及序列分析 | 第72页 |
| 2 二化螟酯酶基因CsCaE026的原核表达和多克隆抗体制备 | 第72-73页 |
| 3 二化螟酯酶基因CsCaE026的表达时空分布 | 第73页 |
| 4 二化螟酯酶基因CsCaE026在Bac-to-Bac系统中的表达 | 第73页 |
| 5 本论文的创新点 | 第73-74页 |
| 6 今后研究方向 | 第74-75页 |
| 主要参考文献 | 第75-78页 |
