| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写字母 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1. 防御素简介 | 第10-13页 |
| 1.1 防御素的种类及分布 | 第10-11页 |
| 1.2 防御素的生物活性 | 第11-12页 |
| 1.2.1 抗细菌与真菌作用 | 第11-12页 |
| 1.2.2 抗病毒与肿瘤细胞作用 | 第12页 |
| 1.3 防御素的主要作用机理 | 第12-13页 |
| 1.3.1 抗菌作用机理 | 第12-13页 |
| 1.3.2 抗病毒与肿瘤细胞作用机理 | 第13页 |
| 2. 鸡防御素研究现状 | 第13-16页 |
| 2.1 鸡防御素的基因工程研究 | 第14-16页 |
| 2.2 鸡防御素的局限性 | 第16页 |
| 3. 鸡防御素的应用前景 | 第16-17页 |
| 4. 本项目研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 鸡Gal-13成熟肽cDNA的原核表达 | 第18-34页 |
| 1. 试验材料 | 第18-20页 |
| 1.1 试验动物 | 第18页 |
| 1.2 质粒与菌株 | 第18页 |
| 1.3 酶和试剂 | 第18页 |
| 1.4 PCR引物设计与合成 | 第18-19页 |
| 1.5 仪器 | 第19页 |
| 1.6 试剂及培养基的配制 | 第19-20页 |
| 2. 试验方法 | 第20-27页 |
| 2.1 鸡Gal-13全长序列的扩增 | 第20-21页 |
| 2.2 pMD18-T-Gal-13质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.1 目的片段的回收 | 第21-22页 |
| 2.2.2 目的片段与克隆载体的连接 | 第22页 |
| 2.3 重组质粒的转化及转化子的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.4 Gal-13全长序列的测序与分析 | 第23-24页 |
| 2.4.1 重组质粒的提取与测序 | 第23-24页 |
| 2.4.2 Gal-13全长序列的分析及系统发育进化树的构建 | 第24页 |
| 2.5 Gal-13成熟肽的原核表达与鉴定 | 第24-27页 |
| 2.5.1 原核表达载体的构建及鉴定 | 第24-25页 |
| 2.5.2 融合蛋白的诱导表达与鉴定 | 第25-27页 |
| 2.5.3 诱导表达条件的优化及表达产物的可溶性分析 | 第27页 |
| 3. 试验结果 | 第27-32页 |
| 3.1 目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2 序列比对分析及进化树的构建 | 第28-29页 |
| 3.3 成熟肽基因序列的扩增 | 第29页 |
| 3.4 重组菌株的筛选鉴定 | 第29-30页 |
| 3.5 表达产物的鉴定分析 | 第30-31页 |
| 3.6 诱导表达条件的优化 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-33页 |
| 4.1 Gal-13序列的分析鉴定 | 第32页 |
| 4.2 原核表达系统研究 | 第32-33页 |
| 5. 结论 | 第33-34页 |
| 第三章 Gal-13成熟肽的真核表达 | 第34-50页 |
| 1. 试验材料 | 第34-36页 |
| 1.1 菌株与载体 | 第34页 |
| 1.2 试剂 | 第34页 |
| 1.3 仪器 | 第34页 |
| 1.4 试剂及培养基的配制 | 第34-36页 |
| 2. 试验方法 | 第36-43页 |
| 2.1 Gal-13成熟肽基因序列的扩增 | 第36页 |
| 2.2 重组质粒pPICZαA-Gal-13的构建 | 第36-37页 |
| 2.3 重组质粒转化DH5α大肠杆菌 | 第37页 |
| 2.3.1 重组质粒的转化及转化子的筛选鉴定 | 第37页 |
| 2.4 重组质粒的线性化 | 第37-38页 |
| 2.5 毕赤酵母X-33的电穿孔转化 | 第38-39页 |
| 2.6 重组菌株的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.6.1 重组酵母的表型鉴定 | 第39-40页 |
| 2.6.2 高抗性菌株的筛选鉴定 | 第40页 |
| 2.7 重组酵母的诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.8 诱导表达产物的Tricine-SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
| 2.9 酵母表达产物的抑菌活性分析 | 第42-43页 |
| 3. 结果 | 第43-47页 |
| 3.1 Gal-13成熟肽序列的扩增 | 第43页 |
| 3.3 重组菌株DH5a的筛选鉴定 | 第43-46页 |
| 3.3.1 重组质粒的线性化与转化 | 第44-45页 |
| 3.3.2 表型鉴定 | 第45页 |
| 3.3.3 高抗性菌株的筛选鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4 重组酵母的诱导表达 | 第46-47页 |
| 3.5 表达产物的抑菌活性 | 第47页 |
| 4. 讨论 | 第47-49页 |
| 4.1 酵母表达菌株的选择 | 第47-48页 |
| 4.2 毕赤酵母表达载体的选择 | 第48-49页 |
| 4.3 毕赤酵母的诱导表达 | 第49页 |
| 5. 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
