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凋亡诱导因子(AIF)在小鼠毛囊周期中的表达调控研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
前言第13-15页
第1章 绪论第15-33页
    1.1 毛囊周期概述第15-17页
    1.2 毛囊周期与细胞凋亡第17-19页
        1.2.1 细胞凋亡第17-18页
        1.2.2 Caspase 3 与 Caspase 家族第18页
        1.2.3 细胞凋亡与毛囊周期第18-19页
    1.3 AIF——一种不依赖于 CASPASES 活性的凋亡因子第19-27页
        1.3.1 凋亡诱导因子第19-21页
        1.3.2 AIF 的双重生理功能第21页
        1.3.3 AIF 在组织和细胞中选择性表达第21-22页
        1.3.4 促使 AIF 发挥生物学功能的信号分子第22-27页
            1.3.4.1 ROS 自由基的产生是促使 AIF 发挥凋亡效应的关键性因素第22-25页
                1.3.4.1.1 ROS 概述第22-23页
                1.3.4.1.2 ROS 与 AIF第23-25页
            1.3.4.2 胞内 Ca2+超载和钙蛋白酶的作用促进了 AIF 的成熟第25-26页
            1.3.4.3 AIF 转位入核的过程受 Hsp 70 特异性抑制第26-27页
    1.4 毛囊周期与 AIF第27-30页
        1.4.1 在毛囊周期调控中毛囊组织周围存在自由基的作用第27页
        1.4.2 钙蛋白酶和组织蛋白酶-L 参与调控毛囊周期第27-28页
        1.4.3 热休克蛋白(HSP)家族对毛囊周期的调控第28页
        1.4.4 Cyclosporine A 对毛囊周期调控的影响第28-29页
        1.4.5 TNF-α介导的死亡受体通路可能与 AIF 协同作用于毛囊周期第29-30页
    1.5 AIF/CYP A 与 DNA 修复酶 PARP-1第30-32页
        1.5.1 PARP-1 与 Parthanatos第30-31页
        1.5.2 AIF 与 Cyp A 结合共同入核发挥凋亡功能第31-32页
    1.6 总结与展望第32-33页
第2章 AIF 在毛囊组织中的表达第33-47页
    2.1 材料与方法第33-40页
        2.1.1 实验动物第33页
        2.1.2 实验仪器第33-34页
        2.1.3 实验试剂及器材第34-36页
            2.1.3.1 试剂第34-35页
            2.1.3.2 器材第35-36页
        2.1.4 实验方法第36-40页
            2.1.4.1 动物模型第36页
            2.1.4.2 从皮肤中分离纯化毛囊组织第36页
            2.1.4.3 毛囊组织总 RNA 的提取第36-37页
            2.1.4.4 将 RNA 逆转录为 cDNA第37页
            2.1.4.5 PCR 扩增 AIF 基因片段第37-38页
            2.1.4.6 琼脂糖凝胶电泳分离 AIF 基因片段第38页
            2.1.4.7 毛囊组织总蛋白的提取第38页
            2.1.4.8 Western blot 检测 AIF 总蛋白第38-39页
            2.1.4.9 组织包埋与切片第39页
            2.1.4.10 HE 染色观察皮肤及毛囊组织形态学结构第39页
            2.1.4.11 免疫组织化学法检测 AIF 在小鼠毛囊组织中的表达极其定位第39-40页
    2.2 实验结果第40-47页
        2.2.1 小鼠毛囊组织的分离纯化第40-41页
        2.2.2 PCR 检测 AIF 基因的表达第41-42页
        2.2.3 Western blot 检测 AIF 蛋白中毛囊周期中的表达情况第42-43页
        2.2.4 C57BL/6 小鼠毛囊周期皮肤组织 HE 染色第43-44页
        2.2.5 免疫组化检测 AIF 在小鼠毛囊中的表达部位第44-47页
第3章 探讨 AIF 在毛囊周期调控中的作用第47-67页
    3.1 材料与方法第47-54页
        3.1.1 主要仪器设备第47-48页
        3.1.2 主要试剂第48-50页
        3.1.3 实验方法第50-54页
            3.1.3.1 PCR 检测凋亡相关基因的表达第50-51页
            3.1.3.2 琼脂糖凝胶电泳分离分析凋亡相关基因的表达第51页
            3.1.3.3 Western Blot 检测凋亡相关蛋白的表达第51-52页
            3.1.3.4 TUNEL 分别与 AIF、Cyp A 荧光染色第52-53页
            3.1.3.5 AIF 与 Cyp A 双重荧光染色第53-54页
    3.2 实验结果第54-67页
        3.2.1 PCR 检测 AIF 凋亡通路和膜受体通路相关基因的表达第54-56页
        3.2.2 Western blot 检测线粒体凋亡信号通路相关蛋白的表达第56-59页
        3.2.3 TUNEL 与 AIF/Cyp A 荧光染色第59-64页
        3.2.4 AIF 与 Cyp A 荧光双染第64-67页
第4章 线粒体凋亡信号通路抑制剂对毛囊周期的影响第67-81页
    4.1 材料与方法第67-71页
        4.1.1 主要仪器设备第67-68页
        4.1.2 主要试剂第68-69页
        4.1.3 实验方法第69-71页
            4.1.3.1 动物实验第69-70页
            4.1.3.2 HE 染色观察给药小鼠皮肤及毛囊组织形态学结构变化第70页
            4.1.3.3 Western Blot 检测凋亡相关蛋白给药前后表达变化第70-71页
            4.1.3.4 免疫组织化学法检测 AIF 和 Hsp 70 在 Cyclosporine A 给药前后表达量变化第71页
    4.2 实验结果第71-81页
        4.2.1 HE 染色观察抑制剂注射后小鼠皮肤形态学改变第71-73页
        4.2.2 Western Blot 法分析三种抑制剂给药前后毛囊组织中线粒体凋亡通路相关蛋白的表达变化第73-80页
            4.2.2.1 Cyclosporine A 给药第74-76页
            4.2.2.2 Caspase 3 Inhibitor 给药第76-78页
            4.2.2.3 Calpain Inhibitor I 给药第78-80页
        4.2.3 免疫组织化学法检测 Cyclosporine A 给药后 AIF 和 Hsp蛋白表达量的变化第80-81页
第5章 讨论第81-89页
    5.1 酶消化法分离 C57BL/6 小鼠背皮毛囊组织第81页
    5.2 凋亡诱导因子(AIF)是毛囊周期调控的关键因子第81-83页
    5.3 AIF 对毛囊干细胞的调控第83-84页
    5.4 AIF 诱导了毛囊细胞走向死亡第84-85页
    5.5 凋亡通路抑制剂可能成为治疗脱发的有效药物第85-87页
    5.6 PARP-1 的过度激活可以促进 AIF 进入细胞核第87页
    5.7 总结第87-88页
    5.8 AIF 在毛囊生物学研究中的展望第88-89页
结论第89-91页
参考文献第91-101页
创新性总结第101-103页
作者简介及博士期间所取得的科研成果第103-105页
致谢第105页

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