中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
前言 | 第13-15页 |
第1章 绪论 | 第15-33页 |
1.1 毛囊周期概述 | 第15-17页 |
1.2 毛囊周期与细胞凋亡 | 第17-19页 |
1.2.1 细胞凋亡 | 第17-18页 |
1.2.2 Caspase 3 与 Caspase 家族 | 第18页 |
1.2.3 细胞凋亡与毛囊周期 | 第18-19页 |
1.3 AIF——一种不依赖于 CASPASES 活性的凋亡因子 | 第19-27页 |
1.3.1 凋亡诱导因子 | 第19-21页 |
1.3.2 AIF 的双重生理功能 | 第21页 |
1.3.3 AIF 在组织和细胞中选择性表达 | 第21-22页 |
1.3.4 促使 AIF 发挥生物学功能的信号分子 | 第22-27页 |
1.3.4.1 ROS 自由基的产生是促使 AIF 发挥凋亡效应的关键性因素 | 第22-25页 |
1.3.4.1.1 ROS 概述 | 第22-23页 |
1.3.4.1.2 ROS 与 AIF | 第23-25页 |
1.3.4.2 胞内 Ca2+超载和钙蛋白酶的作用促进了 AIF 的成熟 | 第25-26页 |
1.3.4.3 AIF 转位入核的过程受 Hsp 70 特异性抑制 | 第26-27页 |
1.4 毛囊周期与 AIF | 第27-30页 |
1.4.1 在毛囊周期调控中毛囊组织周围存在自由基的作用 | 第27页 |
1.4.2 钙蛋白酶和组织蛋白酶-L 参与调控毛囊周期 | 第27-28页 |
1.4.3 热休克蛋白(HSP)家族对毛囊周期的调控 | 第28页 |
1.4.4 Cyclosporine A 对毛囊周期调控的影响 | 第28-29页 |
1.4.5 TNF-α介导的死亡受体通路可能与 AIF 协同作用于毛囊周期 | 第29-30页 |
1.5 AIF/CYP A 与 DNA 修复酶 PARP-1 | 第30-32页 |
1.5.1 PARP-1 与 Parthanatos | 第30-31页 |
1.5.2 AIF 与 Cyp A 结合共同入核发挥凋亡功能 | 第31-32页 |
1.6 总结与展望 | 第32-33页 |
第2章 AIF 在毛囊组织中的表达 | 第33-47页 |
2.1 材料与方法 | 第33-40页 |
2.1.1 实验动物 | 第33页 |
2.1.2 实验仪器 | 第33-34页 |
2.1.3 实验试剂及器材 | 第34-36页 |
2.1.3.1 试剂 | 第34-35页 |
2.1.3.2 器材 | 第35-36页 |
2.1.4 实验方法 | 第36-40页 |
2.1.4.1 动物模型 | 第36页 |
2.1.4.2 从皮肤中分离纯化毛囊组织 | 第36页 |
2.1.4.3 毛囊组织总 RNA 的提取 | 第36-37页 |
2.1.4.4 将 RNA 逆转录为 cDNA | 第37页 |
2.1.4.5 PCR 扩增 AIF 基因片段 | 第37-38页 |
2.1.4.6 琼脂糖凝胶电泳分离 AIF 基因片段 | 第38页 |
2.1.4.7 毛囊组织总蛋白的提取 | 第38页 |
2.1.4.8 Western blot 检测 AIF 总蛋白 | 第38-39页 |
2.1.4.9 组织包埋与切片 | 第39页 |
2.1.4.10 HE 染色观察皮肤及毛囊组织形态学结构 | 第39页 |
2.1.4.11 免疫组织化学法检测 AIF 在小鼠毛囊组织中的表达极其定位 | 第39-40页 |
2.2 实验结果 | 第40-47页 |
2.2.1 小鼠毛囊组织的分离纯化 | 第40-41页 |
2.2.2 PCR 检测 AIF 基因的表达 | 第41-42页 |
2.2.3 Western blot 检测 AIF 蛋白中毛囊周期中的表达情况 | 第42-43页 |
2.2.4 C57BL/6 小鼠毛囊周期皮肤组织 HE 染色 | 第43-44页 |
2.2.5 免疫组化检测 AIF 在小鼠毛囊中的表达部位 | 第44-47页 |
第3章 探讨 AIF 在毛囊周期调控中的作用 | 第47-67页 |
3.1 材料与方法 | 第47-54页 |
3.1.1 主要仪器设备 | 第47-48页 |
3.1.2 主要试剂 | 第48-50页 |
3.1.3 实验方法 | 第50-54页 |
3.1.3.1 PCR 检测凋亡相关基因的表达 | 第50-51页 |
3.1.3.2 琼脂糖凝胶电泳分离分析凋亡相关基因的表达 | 第51页 |
3.1.3.3 Western Blot 检测凋亡相关蛋白的表达 | 第51-52页 |
3.1.3.4 TUNEL 分别与 AIF、Cyp A 荧光染色 | 第52-53页 |
3.1.3.5 AIF 与 Cyp A 双重荧光染色 | 第53-54页 |
3.2 实验结果 | 第54-67页 |
3.2.1 PCR 检测 AIF 凋亡通路和膜受体通路相关基因的表达 | 第54-56页 |
3.2.2 Western blot 检测线粒体凋亡信号通路相关蛋白的表达 | 第56-59页 |
3.2.3 TUNEL 与 AIF/Cyp A 荧光染色 | 第59-64页 |
3.2.4 AIF 与 Cyp A 荧光双染 | 第64-67页 |
第4章 线粒体凋亡信号通路抑制剂对毛囊周期的影响 | 第67-81页 |
4.1 材料与方法 | 第67-71页 |
4.1.1 主要仪器设备 | 第67-68页 |
4.1.2 主要试剂 | 第68-69页 |
4.1.3 实验方法 | 第69-71页 |
4.1.3.1 动物实验 | 第69-70页 |
4.1.3.2 HE 染色观察给药小鼠皮肤及毛囊组织形态学结构变化 | 第70页 |
4.1.3.3 Western Blot 检测凋亡相关蛋白给药前后表达变化 | 第70-71页 |
4.1.3.4 免疫组织化学法检测 AIF 和 Hsp 70 在 Cyclosporine A 给药前后表达量变化 | 第71页 |
4.2 实验结果 | 第71-81页 |
4.2.1 HE 染色观察抑制剂注射后小鼠皮肤形态学改变 | 第71-73页 |
4.2.2 Western Blot 法分析三种抑制剂给药前后毛囊组织中线粒体凋亡通路相关蛋白的表达变化 | 第73-80页 |
4.2.2.1 Cyclosporine A 给药 | 第74-76页 |
4.2.2.2 Caspase 3 Inhibitor 给药 | 第76-78页 |
4.2.2.3 Calpain Inhibitor I 给药 | 第78-80页 |
4.2.3 免疫组织化学法检测 Cyclosporine A 给药后 AIF 和 Hsp蛋白表达量的变化 | 第80-81页 |
第5章 讨论 | 第81-89页 |
5.1 酶消化法分离 C57BL/6 小鼠背皮毛囊组织 | 第81页 |
5.2 凋亡诱导因子(AIF)是毛囊周期调控的关键因子 | 第81-83页 |
5.3 AIF 对毛囊干细胞的调控 | 第83-84页 |
5.4 AIF 诱导了毛囊细胞走向死亡 | 第84-85页 |
5.5 凋亡通路抑制剂可能成为治疗脱发的有效药物 | 第85-87页 |
5.6 PARP-1 的过度激活可以促进 AIF 进入细胞核 | 第87页 |
5.7 总结 | 第87-88页 |
5.8 AIF 在毛囊生物学研究中的展望 | 第88-89页 |
结论 | 第89-91页 |
参考文献 | 第91-101页 |
创新性总结 | 第101-103页 |
作者简介及博士期间所取得的科研成果 | 第103-105页 |
致谢 | 第105页 |