| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 PcG蛋白的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 PcG蛋白的发现 | 第13-14页 |
| 1.1.2 PcG蛋白在植物中功能的研究 | 第14-15页 |
| 1.1.3 PcG蛋白介导的转录抑制的分子机制 | 第15页 |
| 1.2 植物中的E(z)基因的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 E(z)基因的结构与功能 | 第15-16页 |
| 1.2.2 E(z)基因的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.3 植物无融合生殖的研究概述 | 第17-19页 |
| 1.3.1 无融合生殖的概念及来源 | 第17-18页 |
| 1.3.2 无融合生殖的基因调控 | 第18-19页 |
| 1.4 龙须草的无融合生殖方式 | 第19页 |
| 1.4.1 龙须草的生活习性及特点 | 第19页 |
| 1.4.2 龙须草的无融合生殖机制 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1 植物材料和种植条件 | 第21页 |
| 2.2 质粒和菌株 | 第21-22页 |
| 3 实验方法 | 第22-32页 |
| 3.1 EbEZ1和EbEZ2基因在龙须草中各发育时期的时空表达 | 第22-26页 |
| 3.1.1 龙须草材料的处理 | 第22页 |
| 3.1.2 原位杂交探针的合成 | 第22-26页 |
| 3.1.2.1 龙须草RNA的抽提与纯化 | 第22页 |
| 3.1.2.2 RNA反转录合成第一链cDNA | 第22-23页 |
| 3.1.2.3 探针目的片段的PCR克隆 | 第23页 |
| 3.1.2.4 PCR产物的回收 | 第23-24页 |
| 3.1.2.5 TA克隆 | 第24页 |
| 3.1.2.6 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第24页 |
| 3.1.2.7 化学转化法转化大肠杆菌感受态细胞 | 第24页 |
| 3.1.2.8 阳性克隆的鉴定与测序 | 第24页 |
| 3.1.2.9 碱裂解法提取质粒 | 第24页 |
| 3.1.2.10 质粒的单酶切 | 第24-25页 |
| 3.1.2.11 酶切产物的纯化 | 第25-26页 |
| 3.2 EbEZ1和EbEZ2基因的亚细胞定位 | 第26-29页 |
| 3.2.1 EbEZ1和EbEZ2基因亚细胞载体的构建 | 第26-28页 |
| 3.2.1.1 EbEZ1和EbEZ2基因cDNA全长的扩增 | 第26页 |
| 3.2.1.2 碱裂解法提质粒 | 第26页 |
| 3.2.1.3 质粒的双酶切 | 第26页 |
| 3.2.1.4 构建重组质粒 | 第26-27页 |
| 3.2.1.5 重组农杆菌工程菌株的获得 | 第27-28页 |
| 3.2.2 洋葱表皮的准备 | 第28页 |
| 3.2.3 基因枪转化法 | 第28-29页 |
| 3.3 EbEZ1和EbEZ2基因在水稻和拟南芥中的遗传转化 | 第29-32页 |
| 3.3.1 转基因载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.3.1.1 龙须草EZl和EZ2cDNA全长的扩增 | 第29页 |
| 3.3.1.2 碱裂解法提质粒 | 第29页 |
| 3.3.1.3 质粒的双酶切 | 第29页 |
| 3.3.1.4 重组质粒的获得 | 第29页 |
| 3.3.1.5 重组农杆菌工程菌株的获得 | 第29-30页 |
| 3.3.2 水稻的转化 | 第30页 |
| 3.3.3 拟南芥中的遗传转化 | 第30-31页 |
| 3.3.3.1 拟南芥的种植 | 第30页 |
| 3.3.3.2 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第30页 |
| 3.3.3.3 转基因拟南芥的筛选 | 第30-31页 |
| 3.3.4 转基因水稻和拟南芥的表型分析 | 第31-32页 |
| 3.3.4.1 转基因水稻种子发育过程的细胞学观察 | 第31页 |
| 3.3.4.2 转基因水稻阳性株系中各相关基因表达量的分析 | 第31页 |
| 3.3.4.3 转基因拟南芥阳性株系中各相关基因表达量的分析 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-46页 |
| 4.1 龙须草EbEZ1和EbEZ2的亚细胞定位 | 第32-33页 |
| 4.1.1 生物信息学预测龙须草EbEZ1和EbEZ2的亚细胞定位 | 第32页 |
| 4.1.2 构建亚细胞定位载体 | 第32-33页 |
| 4.1.3 龙须草EbEZ1和EbEZ2的亚细胞定位结果分析 | 第33页 |
| 4.2 龙须草EbEZ1和EbEZ2的时空表达 | 第33-36页 |
| 4.2.1 原位杂交探针的合成 | 第33-34页 |
| 4.2.2 EbEZ1和EbEZ2基因在龙须草发育过程中的时空表达 | 第34-36页 |
| 4.2.2.1 EbEZ1基因的时空表达 | 第34-35页 |
| 4.2.2.2 EbEZ2基因的时空表达 | 第35-36页 |
| 4.3 EbEZ1和EbEZ2基因在水稻和拟南芥中的遗传转化分析 | 第36-46页 |
| 4.3.1 EbEZ1基因在拟南芥中的转化分析 | 第36-39页 |
| 4.3.2 EbEZ2基因在拟南芥中的转化分析 | 第39-40页 |
| 4.3.3 EbEZ1基因在水稻中的转化分析 | 第40-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 5.1 龙须草EbEZ1和EbEZ2的核定位分析 | 第46页 |
| 5.2 龙须草EbEZ1和EbEZ2时空表达分析 | 第46-47页 |
| 5.3 龙须草EbEZ1基因的转拟南芥和转水稻的功能分析 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 附录一 实验中的引物序列 | 第58-59页 |
| 附录二 常用培养基及试剂的配制 | 第59-62页 |
| 2.1 常用培养基的配制 | 第59-60页 |
| 2.2 常用溶液的配制 | 第60页 |
| 2.3 原位杂交试剂配方 | 第60-62页 |
| 附录三 实验方法 | 第62-68页 |
| 3.1 核酸提取 | 第62-63页 |
| 3.1.1 CTAB法提取RNA | 第62页 |
| 3.1.2 CTAB法提取DNA | 第62-63页 |
| 3.2 碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第63-64页 |
| 3.3 凝胶电泳产物回收 | 第64页 |
| 3.4 TA克隆 | 第64页 |
| 3.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第64-65页 |
| 3.6 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第65页 |
| 3.7 原位杂交步骤 | 第65-67页 |
| 3.8 基因枪轰击注意事项 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
