| 致谢 | 第5-7页 |
| 前言 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第14-22页 |
| 引言 | 第22-24页 |
| 第一部分 miR-34a调控血管平滑肌细胞功能 | 第24-53页 |
| 1. 材料 | 第24-27页 |
| 1.1 小鼠 | 第24页 |
| 1.2 细胞培养相关试剂 | 第24页 |
| 1.3 其他试剂及缓冲液 | 第24-25页 |
| 1.4 常用仪器及耗材 | 第25-26页 |
| 1.5 所用分析软件 | 第26-27页 |
| 2. 方法 | 第27-36页 |
| 2.1 小鼠血管平滑肌细胞原代培养 | 第27-28页 |
| 2.2 血管平滑肌细胞传代培养 | 第28页 |
| 2.3 血管平滑肌细胞体外表型转化研究模型 | 第28-29页 |
| 2.4 平滑肌细胞miRNA模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitors)转染 | 第29-30页 |
| 2.5 细胞中总RNA提取 | 第30页 |
| 2.6 miRNA cDNA合成与实时定量PCR(RT-qPCR) | 第30-32页 |
| 2.7 平滑肌细胞增殖实验 | 第32-33页 |
| 2.8 平滑肌细胞迁移实验 | 第33-34页 |
| 2.9 平滑肌细胞凋亡实验 | 第34-35页 |
| 2.10 统计分析 | 第35-36页 |
| 3. 结果 | 第36-51页 |
| 3.1 成功分离血管平滑肌细胞并体外培养 | 第36-38页 |
| 3.2 miR-34a在多种病理生理因素刺激下的血管平滑肌细胞中显著下降 | 第38-39页 |
| 3.3 血管平滑肌细胞中成功高表达和抑制miR-34a | 第39-40页 |
| 3.4 miR-34a抑制血管平滑肌细胞增殖 | 第40-42页 |
| 3.5 miR-34a抑制血管平滑肌细胞迁移 | 第42-48页 |
| 3.6 miR-34a不影响血管平滑肌细胞凋亡 | 第48-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| 第二部分 miR-34a调控Notch1表达影响平滑肌细胞功能 | 第53-80页 |
| 1. 材料 | 第53-56页 |
| 1.1 细胞培养试剂 | 第53页 |
| 1.2 分子生物学常用试剂及缓冲液 | 第53-55页 |
| 1.3 常用仪器及耗材 | 第55页 |
| 1.4 统计及分析软件 | 第55-56页 |
| 2. 方法 | 第56-67页 |
| 2.1 预测并筛选miR-34a靶基因 | 第56页 |
| 2.2 靶基因Notchl 3'UTR荧光素酶报告基因构建 | 第56-61页 |
| 2.3 靶基因Notchl 3'UTR 上 miR-34a结合位点突变 | 第61-63页 |
| 2.4 荧光素酶报告实验和β-gal活性检测 | 第63页 |
| 2.5 Western Blot蛋白检测 | 第63-65页 |
| 2.6 平滑肌细胞miR-34a模拟物和Notch1质粒共转染 | 第65-66页 |
| 2.7 平滑肌细胞功能实验 | 第66页 |
| 2.8 统计分析方法 | 第66-67页 |
| 3. 结果 | 第67-78页 |
| 3.1 生物信息学分析显示Notch1是miR-34a的靶基因 | 第67-68页 |
| 3.2 miR-34a在mRNA和蛋白水平调控Notch1表达 | 第68-69页 |
| 3.3 miR-34a通过直接结合Notchl 3'UTR上的结合位点下调Notch1表达 | 第69-71页 |
| 3.4 Notch1介导miR-34a调控血管平滑肌细胞增殖及迁移功能 | 第71-78页 |
| 4. 讨论 | 第78-80页 |
| 第三部分 miR-34a对小鼠股动脉损伤内膜增生的影响 | 第80-96页 |
| 1. 材料 | 第80-82页 |
| 1.1 小鼠 | 第80页 |
| 1.2 动物实验手术器械 | 第80页 |
| 1.3 常用试剂及缓冲液 | 第80-81页 |
| 1.4 常用仪器及耗材 | 第81页 |
| 1.5 统计分析软件 | 第81-82页 |
| 2. 方法 | 第82-86页 |
| 2.1 小鼠股动脉导丝损伤内膜增生模型 | 第82页 |
| 2.2 小鼠在体miR-34a过表达干预导丝损伤血管 | 第82-83页 |
| 2.3 小鼠血管组织RNA提取及检测 | 第83页 |
| 2.4 小鼠血管取材及石蜡包埋切片 | 第83-84页 |
| 2.5 血管石蜡切片HE染色分析 | 第84页 |
| 2.6 血管石蜡切片免疫染色 | 第84-85页 |
| 2.7 统计分析 | 第85-86页 |
| 3. 结果 | 第86-94页 |
| 3.1 成功建立小鼠股动脉导丝损伤内膜病理性增生模型 | 第86-87页 |
| 3.2 血管损伤后miR-34a表达显著降低 | 第87-89页 |
| 3.3 在体miR-34a高表达减轻血管损伤后内膜病理性增生 | 第89-91页 |
| 3.4 miR-34a通过下调Notch1表达减轻血管损伤后内膜病理性增生 | 第91-94页 |
| 4. 讨论 | 第94-96页 |
| 总结与展望 | 第96-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 综述 | 第110-160页 |
| 参考文献 | 第132-160页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第160-162页 |
