| 摘 要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 主要符号对照表 | 第11-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-41页 |
| 1.1 磷酸原激酶概述 | 第13-18页 |
| 1.2 肌酸激酶(CK) | 第18-25页 |
| 1.2.1 肌酸激酶的分布及生理功能 | 第18-19页 |
| 1.2.2 肌酸激酶的同工酶及分布 | 第19页 |
| 1.2.3 肌酸激酶的结构 | 第19-20页 |
| 1.2.4 肌酸激酶的活性中心 | 第20-22页 |
| 1.2.5 肌酸激酶的亚基界面 | 第22页 |
| 1.2.6 肌酸激酶亚基之间的相互作用 | 第22-24页 |
| 1.2.7 肌酸激酶的纯化和活性测定 | 第24页 |
| 1.2.8 肌酸激酶的体外去折叠与再折叠的研究 | 第24-25页 |
| 1.3 精氨酸激酶(AK) | 第25-33页 |
| 1.3.1 精氨酸激酶的分子形式 | 第26-27页 |
| 1.3.2 精氨酸激酶的结构 | 第27-30页 |
| 1.3.3 精氨酸激酶的活性中心和催化机制研究 | 第30-32页 |
| 1.3.4 外界因素对精氨酸激酶的影响 | 第32-33页 |
| 1.3.5 精氨酸激酶的测活方法 | 第33页 |
| 1.4 CK和AK之间的进化关系 | 第33-35页 |
| 1.5 蛋白质折叠研究概述 | 第35-39页 |
| 1.5.1 维系蛋白质结构的作用力 | 第35页 |
| 1.5.2 蛋白质的变性 | 第35-36页 |
| 1.5.3 常用的蛋白质变性剂 | 第36页 |
| 1.5.4 研究蛋白质折叠的常用技术 | 第36页 |
| 1.5.5 蛋白质的去折叠途径 | 第36-37页 |
| 1.5.6 蛋白质的部分折叠态 | 第37-38页 |
| 1.5.7 蛋白质折叠过渡态 | 第38-39页 |
| 1.6 本论文的研究目的和主要内容 | 第39-41页 |
| 第二章 N末端氨基酸缺失对肌酸激酶结构和功能的影响 | 第41-70页 |
| 2.1 前言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第42-50页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 2.2.2 兔肌CK cDNA 的克隆 | 第43-45页 |
| 2.2.3 兔肌CK的表达 | 第45页 |
| 2.2.4 兔肌CK的纯化 | 第45页 |
| 2.2.5 兔肌CK 的N末端缺失突变体的获得 | 第45-47页 |
| 2.2.6 测活方法以及Km的测定 | 第47-48页 |
| 2.2.7 突变体CKND6与野生型CK的变性 | 第48页 |
| 2.2.8 光谱学方法检测 | 第48页 |
| 2.2.9 凝胶过滤层析(SEC) | 第48页 |
| 2.2.10 差示扫描量热实验(DSC) | 第48-49页 |
| 2.2.11 脲梯度电泳(UGGE) | 第49页 |
| 2.2.12 核磁共振实验 (NMR) | 第49-50页 |
| 2.3 实验结果 | 第50-66页 |
| 2.3.1 酶基因的克隆 | 第50-52页 |
| 2.3.2 缺失突变体重组质粒pCKND6的构建 | 第52页 |
| 2.3.3 蛋白质表达和纯化 | 第52-54页 |
| 2.3.4 比活和米氏常数的测定 | 第54页 |
| 2.3.5 野生型CK和突变体CKND6的凝胶过滤层析 | 第54页 |
| 2.3.6 野生型CK和突变体CKND6的CD光谱和内源荧光光谱 | 第54-57页 |
| 2.3.7 在变性剂脲中的稳定性比较 | 第57-62页 |
| 2.3.7.1 突变体CKND6与野生型CK在脲溶液中的活性变化 | 第57页 |
| 2.3.7.2 突变体CKND6与野生型CK在脲溶液中的荧光变化 | 第57-58页 |
| 2.3.7.3 突变体CKND6与野生型CK在脲溶液中的ANS荧光变化 | 第58-59页 |
| 2.3.7.4 突变体CKND6与野生型CK在脲溶液中的CD光谱变化 | 第59-60页 |
| 2.3.7.5 突变体CKND6与野生型CK在不同浓度脲溶液中的凝胶过滤层析(SEC) | 第60-61页 |
| 2.3.7.6 野生型CK与突变体CKND6的脲梯度电泳(UGGE) | 第61-62页 |
| 2.3.8 突变体CKND6与野生型CK的热稳定性比较 | 第62-63页 |
| 2.3.9 突变体CKND6与野生型CK的NMR一维谱比较 | 第63-66页 |
| 2.4 讨论 | 第66-70页 |
| 第三章 海参双亚基精氨酸激酶的原核表达和蛋白质纯化 | 第70-82页 |
| 3.1 前言 | 第70页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第70-75页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第70-71页 |
| 3.2.2 AK cDNA 的克隆 | 第71-73页 |
| 3.2.3 AK的表达 | 第73页 |
| 3.2.4 AK的纯化 | 第73页 |
| 3.2.5 AK的活性测定 | 第73-75页 |
| 3.2.6 等电聚焦电泳(IEF) | 第75页 |
| 3.2.7 光谱学方法检测 | 第75页 |
| 3.3 实验结果和讨论 | 第75-82页 |
| 3.3.1 基因的克隆 | 第75-77页 |
| 3.3.2 基因的表达和纯化 | 第77-79页 |
| 3.3.3 精氨酸激酶的理化性质分析 | 第79-82页 |
| 第四章 海参双亚基精氨酸激酶的去折叠研究 | 第82-92页 |
| 4.1 前言 | 第82页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第82-83页 |
| 4.2.1 试验试剂 | 第82页 |
| 4.2.2 AK蛋白的纯化和测活 | 第82-83页 |
| 4.2.3 脲处理 | 第83页 |
| 4.2.4 光谱学方法检测 | 第83页 |
| 4.2.5 凝胶过滤层析(SEC) | 第83页 |
| 4.2.6 脲梯度电泳(UGGE) | 第83页 |
| 4.3 实验结果 | 第83-90页 |
| 4.3.1 精氨酸激酶在不同浓度脲溶液中的活性变化 | 第83-84页 |
| 4.3.2 不同浓度脲作用下精氨酸激酶的三级结构变化 | 第84-87页 |
| 4.3.3 不同浓度脲作用下精氨酸激酶的二级结构变化 | 第87-89页 |
| 4.3.4 精氨酸激酶在脲溶液中的亚基解聚 | 第89-90页 |
| 4.3.5 精氨酸激酶的脲梯度电泳(UGGE) | 第90页 |
| 4.4 讨论 | 第90-92页 |
| 第五章 精氨酸激酶及其底物复合物的结晶和初步晶体学研究 | 第92-99页 |
| 5.1 前言 | 第92页 |
| 5.2 材料与方法 | 第92-93页 |
| 5.2.1 酶蛋白的获得 | 第92页 |
| 5.2.2 晶体生长 | 第92-93页 |
| 5.2.3 X-射线衍射实验 | 第93页 |
| 5.2.4 用分子置换法求取相位 | 第93页 |
| 5.3 结果 | 第93-97页 |
| 5.3.1 结晶 | 第93-94页 |
| 5.3.2 X-射线衍射图样的采集及晶胞参数的测定 | 第94-96页 |
| 5.3.3 每个不对称单位内蛋白分子数目的确定 | 第96页 |
| 5.3.4 用分子置换法求取相位 | 第96-97页 |
| 5.4 讨论 | 第97-99页 |
| 第六章 结论 | 第99-102页 |
| 参考文献 | 第102-119页 |
| 致谢及声明 | 第119-120页 |
| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的论文 | 第120-121页 |
