| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 5-氨基乙酰丙酸 | 第11-12页 |
| 1.1.1 ALA简介 | 第11页 |
| 1.1.2 5-氨基乙酰丙酸的合成 | 第11-12页 |
| 1.2 发酵过程中发酵条件的影响 | 第12-14页 |
| 1.2.1 发酵过程中温度影响 | 第12-13页 |
| 1.2.2 发酵过程中pH影响 | 第13页 |
| 1.2.3 发酵过程中溶氧影响 | 第13-14页 |
| 1.2.4 发酵过程中培养基底物影响 | 第14页 |
| 1.2.5 发酵过程中泡沫的控制 | 第14页 |
| 1.3 影响ALA在发酵液中稳定性的因素 | 第14-15页 |
| 1.4 ALA发酵过程下游的分离纯化 | 第15-17页 |
| 1.5 FLP/FRT位点专一性重组系统实现目的基因在基因组随机拷贝数的整合 | 第17-18页 |
| 1.6 本论文的研究内容与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料方法 | 第20-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验菌株、质粒和引物 | 第20-21页 |
| 2.2 实验培养及相关试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.1 培养基 | 第21页 |
| 2.2.2 相关试剂与缓冲液 | 第21-22页 |
| 2.3 常用生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.4 常用试剂盒 | 第23页 |
| 2.5 常用的工具酶 | 第23页 |
| 2.6 仪器与设备 | 第23-25页 |
| 2.7 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.7.1 菌种和核酸片段的保藏 | 第25页 |
| 2.7.2 分子生物学常规操作技术 | 第25-29页 |
| 2.7.3 大肠杆菌DH5α的arcA基因敲除 | 第29-30页 |
| 2.7.4 荧光定量PCR检测基因的表达 | 第30-32页 |
| 2.8 ALA发酵方法 | 第32页 |
| 2.8.1 种子培养 | 第32页 |
| 2.8.2 摇瓶发酵 | 第32页 |
| 2.8.3 发酵罐培养 | 第32页 |
| 2.9 检测方法 | 第32-33页 |
| 2.9.1 ALA的检测方法 | 第33页 |
| 2.9.2 菌体OD的测定 | 第33页 |
| 2.9.3 发酵液中葡萄糖浓度的测定 | 第33页 |
| 2.9.4 发酵过程中的副产物检测 | 第33页 |
| 2.10 ALA发酵液的粗提取 | 第33-35页 |
| 2.10.1 产ALA发酵液的预处理 | 第33-34页 |
| 2.10.2 发酵液的超滤膜处理除杂 | 第34页 |
| 2.10.3 发酵液的活性炭脱色 | 第34页 |
| 2.10.4 旋转蒸发除水 | 第34页 |
| 2.10.5 真空冷冻干燥结晶 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第35-57页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 碳酸钙对重组大肠杆菌利用发酵培养基产ALA影响 | 第36-40页 |
| 3.2.1 碳酸钙对发酵产ALA的影响 | 第36页 |
| 3.2.2 调整原先产ALA发酵培养基成分后添加碳酸钙对ALA发酵的影响 | 第36-38页 |
| 3.2.3 验证CaCO_3和钙离子对产ALA发酵的影响 | 第38-40页 |
| 3.3 胰蛋白胨对重组大肠杆菌(DALA)产ALA发酵的影响 | 第40-42页 |
| 3.4 DALA菌株发酵罐培养条件的优化 | 第42-52页 |
| 3.4.1 DALA菌株发酵罐发酵接种量条件的优化 | 第42-44页 |
| 3.4.2 DALA菌株发酵罐发酵温度条件的优化 | 第44-45页 |
| 3.4.3 DALA菌株发酵罐发酵pH条件的优化 | 第45-47页 |
| 3.4.4 DALA菌株发酵罐发酵过程中补加氮源对产ALA的影响 | 第47-49页 |
| 3.4.5 DALA菌株发酵罐发酵溶氧条件的优化 | 第49-52页 |
| 3.5 发酵液中的ALA初步分离纯化 | 第52页 |
| 3.6 利用FLP/FRT位点专一性重组随机整合产ALA C5途径hemA-hemL基因 | 第52-57页 |
| 全文总结 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第64-65页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第65页 |
