| 附件 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 骨骼生长发育研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1.1 骨骼肌发育 | 第13页 |
| 1.1.2 骨骼肌发育调控 | 第13-14页 |
| 1.2 LONG NONCODING RNA (LNCRNA)的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 lncRNA的发现 | 第14-15页 |
| 1.2.2 lncRNA的起源及分类 | 第15页 |
| 1.2.3 lncRNA的生物学功能及作用机制 | 第15-16页 |
| 1.3 LNCRNA与骨骼肌发育 | 第16-17页 |
| 1.4 LNCRNA-GTL2概述 | 第17页 |
| 1.5 本研究的技术路线、目的与意义 | 第17-20页 |
| 1.5.1 实验技术路线 | 第17-18页 |
| 1.5.2 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 LNCRNA-GTL2对C2C12细胞增殖作用的研究 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 载体及菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 试剂及耗材 | 第20页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.6 分析工具及用到的网站 | 第21页 |
| 2.1.7 siRNA序列 | 第21-22页 |
| 2.1.8 定量引物序列 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 PCDNA3.1-GTL2过表达载体的转化 | 第22页 |
| 2.2.2 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第22页 |
| 2.2.3 阳性克隆扩大培养 | 第22-23页 |
| 2.2.4 无内毒素质粒提取 | 第23-24页 |
| 2.2.5 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.2.6 细胞传代 | 第24-25页 |
| 2.2.7 细胞冻存 | 第25页 |
| 2.2.8 细胞铺板 | 第25页 |
| 2.2.9 细胞转染 | 第25-26页 |
| 2.2.10 RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.11 RNA反转录 | 第27页 |
| 2.2.12 荧光定量PCR | 第27页 |
| 2.2.13 CCK8测定细胞增殖 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 过表达及siRNA效果检测 | 第27-29页 |
| 2.3.2 GTL2对C2C12细胞增殖影响分析 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 LNCRNA-GTL2核心启动子确定 | 第31-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第31页 |
| 3.1.2 菌株及载体 | 第31页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 3.1.4 试剂及耗材 | 第31页 |
| 3.1.5 主要试剂的配制 | 第31页 |
| 3.1.6 分析工具及所用网站 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 GTL2基因启动子序列生物信息学分析 | 第32页 |
| 3.2.2 小鼠基因组总DNA的提取 | 第32页 |
| 3.2.3 基因组总DNA提取质量检测 | 第32-33页 |
| 3.2.4 PCR引物设计 | 第33页 |
| 3.2.5 GTL2启动子区域克隆 | 第33页 |
| 3.2.6 PCR产物的检测 | 第33页 |
| 3.2.7 PCR产物的回收纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.8 GTL2-T载体的构建 | 第34页 |
| 3.2.9 重组质粒转化 | 第34页 |
| 3.2.10 阳性克隆鉴定 | 第34页 |
| 3.2.11 小量质粒DNA提取 | 第34-35页 |
| 3.2.12 PGL3-GTL2重组质粒构建 | 第35页 |
| 3.2.13 启动子缺失载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.14 瞬时转染 | 第36页 |
| 3.2.15 双荧光素酶活性检测 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 启动子区域的预测 | 第37页 |
| 3.3.2 启动子活性检测 | 第37-39页 |
| 3.3.3 缺失载体构建结果 | 第39页 |
| 3.3.4 核心启动子区域定位 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 LNCRNA-GTL2与MIRNAS相互作用研究 | 第41-45页 |
| 4.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第41页 |
| 4.1.2 试剂与耗材 | 第41页 |
| 4.1.3 仪器 | 第41页 |
| 4.1.4 分析网站 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 4.2.1 miRNA细胞转染 | 第41页 |
| 4.2.2 细胞总RNA提取 | 第41页 |
| 4.2.3 RNA反转录 | 第41页 |
| 4.2.4 荧光定量PCR | 第41页 |
| 4.2.5 miRNA mimic序列 | 第41-42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 4.3.1 miRNA芯片与lncRNA芯片联合分析 | 第42页 |
| 4.3.2 过表达miRNA对GTL2表达量影响 | 第42-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 小结 | 第45-46页 |
| 5.1 研究结论 | 第45页 |
| 5.2 后续实验 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54页 |
