摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
中英文对照及英文缩写词表 | 第8-13页 |
第一章 前言 | 第13-31页 |
1.1 半乳糖凝集素家族(Galectins)概述 | 第13-24页 |
1.1.1 凝集素 | 第13页 |
1.1.2 半乳糖凝集素的结构与分类 | 第13-16页 |
1.1.3 半乳糖凝集素的表达与分布 | 第16-17页 |
1.1.4 半乳糖凝集素的生理功能 | 第17-22页 |
1.1.5 半乳糖凝集素:解读糖分子信息的“专业读码器” | 第22-24页 |
1.2 半乳糖凝集素-4 的研究进展 | 第24-29页 |
1.2.1 半乳糖凝集素-4 的结构特点 | 第24-27页 |
1.2.2 半乳糖凝集素-4 与配体的亲和 | 第27页 |
1.2.3 半乳糖凝集素-4 的表达分布与生物学功能 | 第27-29页 |
1.3 选题依据和研究意义 | 第29-31页 |
第二章 半乳糖凝集素-4 截短片段表达载体的构建 | 第31-42页 |
2.1 材料、试剂与仪器 | 第31-34页 |
2.1.1 实验材料 | 第31页 |
2.1.2 实验试剂及其配置 | 第31-33页 |
2.1.3 实验仪器 | 第33-34页 |
2.2 实验方法 | 第34-38页 |
2.2.1 引物设计 | 第34页 |
2.2.2 聚合酶链式反应 | 第34-35页 |
2.2.3 TA克隆半乳糖凝集素-4 | 第35-36页 |
2.2.4 目的基因与载体的限制性双酶切 | 第36页 |
2.2.5 目的基因与载体质粒的连接 | 第36-37页 |
2.2.6 制备感受态E.coli DH5α | 第37页 |
2.2.7 转化验证 | 第37页 |
2.2.8 菌落PCR检验阳性克隆 | 第37-38页 |
2.2.9 双酶切验证重组质粒 | 第38页 |
2.2.10 测序及质粒保存 | 第38页 |
2.3 实验结果 | 第38-41页 |
2.3.1 扩增目的片段 | 第38-39页 |
2.3.2 目的基因与载体的限制性双酶切 | 第39页 |
2.3.3 菌落PCR验证阳性克隆 | 第39-40页 |
2.3.4 双酶切验证重组质粒 | 第40-41页 |
2.3.5 测序结果 | 第41页 |
2.4 讨论 | 第41-42页 |
第三章 半乳糖凝集素-4 截短片段的表达纯化及稳定性活性检测 | 第42-55页 |
3.1 材料、试剂与仪器 | 第42-46页 |
3.1.1 实验材料 | 第42页 |
3.1.2 实验试剂及其配制 | 第42-45页 |
3.1.3 实验仪器 | 第45-46页 |
3.2 实验方法 | 第46-50页 |
3.2.1 初步诱导表达目的蛋白 | 第46页 |
3.2.2 大量纯化目的蛋白 | 第46-48页 |
3.2.3 半乳糖凝集素-4 诱导鸡红细胞凝集 | 第48页 |
3.2.4 差异扫描荧光法检测Galectin419-323 稳定性 | 第48-50页 |
3.3 实验结果 | 第50-53页 |
3.3.1 初步诱导表达目的蛋白 | 第50页 |
3.3.2 大量纯化目的蛋白 | 第50-51页 |
3.3.3 半乳糖凝集素-4 诱导鸡红细胞凝集 | 第51-53页 |
3.3.4 差异扫描荧光法检测Galectin419-323 稳定性 | 第53页 |
3.4 讨论 | 第53-55页 |
第四章 半乳糖凝集素-4 截短片段与配体的相互作用 | 第55-69页 |
4.1 材料、试剂与仪器 | 第55-57页 |
4.1.1 实验材料 | 第55页 |
4.1.2 实验试剂及配制 | 第55-57页 |
4.1.3 实验仪器 | 第57页 |
4.2 实验方法 | 第57-60页 |
4.2.1 鸡红细胞凝集的阻抑 | 第57页 |
4.2.2 差异扫描荧光法检测半乳糖凝集素-4 的糖配体 | 第57-58页 |
4.2.3 半乳糖凝集素-4 与去唾液酸胎球蛋白的Pull-Down试验 | 第58-59页 |
4.2.4 免疫共沉淀法检测HT29细胞中Galectin419-323 的配体 | 第59-60页 |
4.3 实验结果 | 第60-67页 |
4.3.1 多糖阻抑半乳糖凝集素-4 凝集鸡血红细胞 | 第60-61页 |
4.3.2 差异扫描荧光法筛选糖配体 | 第61-64页 |
4.3.3 半乳糖凝集素-4 与去唾液酸胎球蛋白的Pull-Down试验 | 第64-65页 |
4.3.4 Galectin419-323 与HT29细胞蛋白的免疫共沉淀 | 第65-67页 |
4.4 讨论 | 第67-69页 |
总结 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-79页 |
致谢 | 第79-80页 |
在读期间公开发表论文及著作情况 | 第80页 |