| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 阿尔茨海默症致病机理及其诊断与治疗 | 第13-20页 |
| 1.1.1 阿尔茨海默症概述 | 第13页 |
| 1.1.2 Aβ与AD致病机理 | 第13-17页 |
| 1.1.3 AD的治疗与诊断 | 第17-19页 |
| 1.1.4 Aβ检测及在AD诊断中的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 Aβ42的制备及修饰 | 第20-24页 |
| 1.2.1 Aβ42简介 | 第20-21页 |
| 1.2.2 Aβ42的制备 | 第21-22页 |
| 1.2.3 蛋白质修饰 | 第22-24页 |
| 1.3 Aβ抗体研究进展与纳米抗体技术 | 第24-30页 |
| 1.3.1 Aβ抗体研究进展 | 第24-26页 |
| 1.3.2 纳米抗体及其特点 | 第26-27页 |
| 1.3.3 纳米抗体的应用 | 第27-29页 |
| 1.3.4 纳米抗体的获得 | 第29-30页 |
| 1.4 本论文的研究目的、内容及意义 | 第30-31页 |
| 2 Aβ42和C-Aβ42的制备 | 第31-50页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.2.1 材料及试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.2 主要仪器及耗材 | 第32-33页 |
| 2.2.3 主要试剂与配方 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-41页 |
| 2.3.1 Aβ42和C-Aβ42基因的合成 | 第34页 |
| 2.3.2 Aβ42和C-Aβ42的初步表达 | 第34-35页 |
| 2.3.3 Aβ42和C-Aβ42的可溶性考察 | 第35页 |
| 2.3.4 Aβ42和C-Aβ42摇瓶表达条件优化 | 第35-36页 |
| 2.3.5 Aβ42和C-Aβ42的发酵 | 第36-37页 |
| 2.3.6 蛋白预处理—HFIP处理包涵体 | 第37页 |
| 2.3.7 DEAE弱阴离子交换层析 | 第37-38页 |
| 2.3.8 透析除盐与真空冷冻干燥 | 第38页 |
| 2.3.9 BCA法测定蛋白浓度 | 第38-39页 |
| 2.3.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| 2.3.11 Tricine-SDS-PAGE与银染 | 第39-41页 |
| 2.4 实验结果及讨论 | 第41-49页 |
| 2.4.1 Aβ42和C-Aβ42的载体构建及表达 | 第41-42页 |
| 2.4.2 Aβ42和C-Aβ42的可溶性考察 | 第42-43页 |
| 2.4.3 Aβ42和C-Aβ42摇瓶表达条件优化 | 第43-46页 |
| 2.4.4 Aβ42和C-Aβ42的发酵 | 第46页 |
| 2.4.5 Aβ42和C-Aβ42的分离纯化 | 第46-49页 |
| 2.4.6 Aβ42和C-Aβ42的除盐与真空冷冻干燥 | 第49页 |
| 2.5 小结 | 第49-50页 |
| 3 Aβ42与C-Aβ42的性质表征 | 第50-63页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 实验材料 | 第50-52页 |
| 3.2.1 材料及试剂 | 第50-51页 |
| 3.2.2 主要仪器及耗材 | 第51页 |
| 3.2.3 主要试剂与配方 | 第51-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-55页 |
| 3.3.1 蛋白样品准备 | 第52页 |
| 3.3.2 Tricine-SDS-PAGE和银染 | 第52页 |
| 3.3.3 分子量测定 | 第52-53页 |
| 3.3.4 Dot-Blot分析 | 第53页 |
| 3.3.5 圆二色谱分析 | 第53-54页 |
| 3.3.6 硫黄素T(ThT)荧光分析 | 第54页 |
| 3.3.7 SD大鼠胎鼠海马神经元原代培养 | 第54-55页 |
| 3.3.8 MTT法检测细胞毒性 | 第55页 |
| 3.4 实验结果及讨论 | 第55-62页 |
| 3.4.1 Tricine-SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| 3.4.2 Aβ42和C-Aβ42的分子量鉴定 | 第56-58页 |
| 3.4.3 Dot-Blot免疫活性分析 | 第58页 |
| 3.4.4 圆二色谱分析 | 第58-59页 |
| 3.4.5 蛋白聚集性质分析 | 第59-61页 |
| 3.4.6 细胞毒性分析 | 第61-62页 |
| 3.5 小结 | 第62-63页 |
| 4 抗人Aβ42纳米抗体的筛选 | 第63-79页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-65页 |
| 4.2.1 材料及试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.2 主要仪器及耗材 | 第64页 |
| 4.2.3 主要试剂及配方 | 第64-65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-70页 |
| 4.3.1 免疫 | 第65页 |
| 4.3.2 建立噬菌体库 | 第65-66页 |
| 4.3.3 噬菌体扩增 | 第66页 |
| 4.3.4 滴度测定 | 第66-67页 |
| 4.3.5 筛选用抗原的准备 | 第67页 |
| 4.3.6 人Aβ42纳米抗体的筛选 | 第67-68页 |
| 4.3.7 单克隆噬菌体的获得 | 第68-69页 |
| 4.3.8 Phage-ELISA检测噬菌体活性 | 第69-70页 |
| 4.3.9 序列测定及比对 | 第70页 |
| 4.4 实验结果及讨论 | 第70-78页 |
| 4.4.1 筛选用抗原的准备 | 第70-72页 |
| 4.4.2 人Aβ42纳米抗体的筛选 | 第72-74页 |
| 4.4.3 Phage-ELISA噬菌体活性检测 | 第74-77页 |
| 4.4.4 序列测定与比对 | 第77-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-79页 |
| 结论与展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录 人Aβ42基因及蛋白序列 | 第86-87页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
