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刺参Apostichopus japonicus (Selenka)对温度胁迫响应分子机理的基础研究

前言第1-12页
摘要第12-14页
Abstract第14-17页
第一章 刺参对温度胁迫调节机理的研究进展第17-31页
   ·温度对刺参生理生态学特征的影响第17-20页
     ·温度对刺参生长发育的影响第17-18页
     ·温度对刺参能量代谢的影响第18-19页
     ·温度对刺参摄食消化的影响第19页
     ·温度对刺参免疫机能的影响第19-20页
   ·水生动物抗逆性的分子生物学研究进展第20-24页
     ·热休克蛋白第21-23页
     ·抗冻蛋白第23页
     ·盐度调节基因第23-24页
   ·抑制性消减杂交技术(SSH)在水生生物抗逆基因筛选中的应用第24-29页
     ·抑制性消减杂交技术原理及步骤第25-26页
     ·抑制性消减杂交技术的优缺点第26-27页
     ·抑制性消减杂交技术的应用第27-29页
   ·本研究的目的意义及研究思路第29-30页
     ·研究目的及意义第29页
     ·研究思路第29-30页
   ·本章小结第30-31页
第二章 高温胁迫下刺参体壁消减cDNA文库的构建第31-46页
   ·前言第31-32页
   ·材料与方法第32-40页
     ·样品采集第32页
     ·刺参体壁总RNA的提取第32-33页
     ·m RNA纯化第33页
     ·消减杂交第33-40页
     ·消减文库效率检测第40页
     ·消减文库的构建第40页
   ·结果与分析第40-43页
     ·不同处理组总RNA及质量评价第40-41页
     ·cDNA合成及酶切纯化第41-42页
     ·抑制性PCR检测第42-43页
     ·消减杂交效果验证第43页
   ·讨论第43-45页
   ·本章小结第45-46页
第三章 高温胁迫下刺参体壁消减cDNA文库的筛选与鉴定第46-60页
   ·前言第46页
   ·材料与方法第46-50页
     ·PCR鉴定消减文库克隆插入片段情况第46-47页
     ·斑点杂交筛选第47-48页
     ·序列测定及功能分析第48页
     ·温度刺激条件下刺参体壁中基因表达差异第48-50页
   ·实验结果第50-56页
     ·差减cDNA文库容量及插入片段大小第50-51页
     ·斑点杂交第51-52页
     ·差减cDNA片段序列的测定及分析第52-54页
     ·基因功能注释第54-55页
     ·实时定量PCR检测差异表达基因转录水平变化第55-56页
   ·讨论第56-59页
   ·本章小结第59-60页
第四章 刺参热休克蛋白90 基因的克隆、鉴定与表达分析第60-76页
   ·前言第60页
   ·材料与方法第60-66页
     ·实验动物的驯养及样品采集第60-61页
     ·实验相关引物信息第61-62页
     ·刺参总RNA的提取第62页
     ·5’-RACE 和3’-RACE cDNA合成第62-64页
     ·3’-RACE扩增第64页
     ·5’-RACE扩增第64-65页
     ·ApHsp90 序列同源性比对、遗传进化树分析及空间结构预测第65页
     ·Aphsp90 基因在刺参不同组织的时空表达第65-66页
     ·数据分析第66页
   ·实验结果第66-73页
     ·刺参Aphsp90 全长cDNA克隆及序列分析第66-68页
     ·ApHsp90 序列同源性分析第68-69页
     ·刺参ApHsp90 结构预测第69-70页
     ·刺参ApHsp90 进化分析第70-71页
     ·不同温度条件下Aphsp90 基因在刺参不同组织的表达分析第71-72页
     ·Aphsp90 基因不同刺激时间表达分析第72-73页
   ·讨论第73-75页
   ·本章小结第75-76页
第五章 刺参热休克蛋白26 基因的克隆、鉴定与表达分析第76-88页
   ·前言第76-77页
   ·材料与方法第77-80页
     ·实验动物的驯养及样品采集第77页
     ·实验相关引物信息第77-78页
     ·刺参总RNA的提取第78页
     ·5’-RACE 和3’-RACE cDNA合成第78页
     ·3’-RACE扩增第78页
     ·5’-RACE扩增第78-79页
     ·ApHsp26 序列同源性比对、遗传进化树分析及空间结构预测第79页
     ·Aphsp26 基因在刺参不同组织的时空表达第79页
     ·数据分析第79-80页
   ·实验结果第80-85页
     ·刺参Aphsp26 全长cDNA克隆及序列分析第80-81页
     ·刺参ApHsp26 序列同源性分析第81-82页
     ·刺参ApHsp26 结构预测第82-83页
     ·刺参ApHsp26 进化分析第83页
     ·不同温度条件下Aphsp26 基因在刺参不同组织的表达分析第83-84页
     ·Aphsp26 基因不同刺激时间表达分析第84-85页
   ·讨论第85-87页
   ·本章小结第87-88页
第六章 不同刺参群体生长及热休克蛋白基因表达差异第88-100页
   ·前言第88-89页
   ·材料与方法第89-92页
     ·实验动物的驯养及样品采集第89-90页
     ·高温刺激对不同群体刺参幼体生长发育的影响第90页
     ·不同群体刺参幼参生长性能测定第90页
     ·不同群体高温耐受性的对比第90页
     ·不同选择群体热刺激后Aphsp90 和Aphsp26 表达量的差异第90-91页
     ·数据分析第91-92页
   ·实验结果第92-97页
     ·不同群体刺参幼体温度胁迫条件下生长率、存活率分析第92-93页
     ·不同群体刺参幼体温度胁迫条件下生长曲线比较第93-94页
     ·不同群体刺参幼参生长性状的比较第94页
     ·不同群体幼参耐温性能差异第94-95页
     ·高温刺激下不同群体幼参 Aphsp90 及 Aphsp26 表达量差异第95-97页
   ·讨论第97-99页
   ·本章小结第99-100页
第七章 总结与展望第100-103页
   ·研究总结第100-101页
   ·创新性第101页
   ·存在的问题第101页
   ·研究展望第101-103页
参考文献第103-117页
博士期间撰写及发表文章情况第117-118页
致谢第118-119页

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