| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语比对表 | 第12-13页 |
| 第一部分 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌的耐药性 | 第13页 |
| 1.2 碳青霉烯类抗生素 | 第13-14页 |
| 1.3 铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4 铜绿假单胞菌的致病性 | 第16-18页 |
| 1.5 细菌中的ABC转运系统 | 第18-21页 |
| 1.5.1 ABC转运子的结构 | 第19-20页 |
| 1.5.2 ABC转运子的转运机制 | 第20页 |
| 1.5.3 ABC转运子在微生物耐药性与致病性方面的研究 | 第20-21页 |
| 1.6 研究内容及意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和引物 | 第23-25页 |
| 2.1.2 培养基和缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.3 试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 铜绿假单胞菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶核酸片段回收纯化 | 第29页 |
| 2.2.5 酶切与连接 | 第29页 |
| 2.2.6 电转化 | 第29-30页 |
| 2.2.7 构建敲除突变体 | 第30-32页 |
| 2.2.8 基因敲除突变体的互补 | 第32-33页 |
| 2.2.9 抗生素敏感性的检测 | 第33页 |
| 2.2.10 抗生素最低抑制浓度(MIC)的检测 | 第33-34页 |
| 2.2.11 外排泵表达水平的测定 | 第34页 |
| 2.2.12 溶血能力的测定测定 | 第34页 |
| 2.2.13 PQS的提取及薄层层析 | 第34-35页 |
| 2.2.14 绿脓菌素的测定 | 第35页 |
| 2.2.15 蛋白水解酶活性检测 | 第35页 |
| 2.2.16 果蝇模型检测致病性 | 第35-36页 |
| 2.2.17 白菜模型检测致病性 | 第36-37页 |
| 第三部分 结果 | 第37-51页 |
| 3.1 PA4591基因功能的研究 | 第37-45页 |
| 3.1.1 基因PA4591的相关信息 | 第37页 |
| 3.1.2 基因PA4591的敲除与互补 | 第37-39页 |
| 3.1.3 基因PA4591涉及到对碳青霉烯类抗生素的敏感性 | 第39-40页 |
| 3.1.4 突变体中mexAB外排泵表达增加 | 第40页 |
| 3.1.5 双突变体PAO1(△4591△mexAB)的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.6 PAO1(△4591)丧失溶血能力 | 第41-42页 |
| 3.1.7 PAO1(△4591)中PQS产量明显降低 | 第42-43页 |
| 3.1.8 PA4591突变影响绿脓菌素的合成 | 第43-44页 |
| 3.1.9 PA4591突变影响蛋白水解酶活性 | 第44页 |
| 3.1.10 PAO1(△4591)降低铜绿假单胞菌的致病能力 | 第44-45页 |
| 3.2 ABC转运子PA4591-PA4594功能的初步探索 | 第45-51页 |
| 3.2.1 操纵子PA4591-PA4594的生物信息学分析 | 第46-48页 |
| 3.2.2 基因PA4592、PA4593和PA4594敲除突变体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.3 PAO1(△4592)、PA01(△4593)和PAO1(△4594)溶血能力的检测 | 第49-50页 |
| 3.2.4 PAO1(△4592)、PA01(△4593)和PAO1(△4594)抗生素敏感性的变化 | 第50-51页 |
| 第四部分 总结与讨论 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
