| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 引言 | 第9-21页 |
| 1.1 血液概述 | 第9页 |
| 1.2 血红蛋白(Hb)概述 | 第9-10页 |
| 1.3 血液替代品 | 第10-17页 |
| 1.3.1 发展血液替代品的必要性 | 第10-11页 |
| 1.3.2 血红蛋白类氧载体（Hemoglobin-based oxygen carriers, HBOCs） | 第11-12页 |
| 1.3.3 初代血红蛋白类氧载体 | 第12-13页 |
| 1.3.4 二代血红蛋白类氧载体 | 第13-14页 |
| 1.3.5 重组人血红蛋白类氧载体 (Recombinant Haemoglobin-based oxygen carriers, rHBOCs) | 第14-15页 |
| 1.3.6 用囊泡包裹的血红蛋白，人造红细胞 | 第15-16页 |
| 1.3.7 通过胚胎干细胞诱导产生红细胞 | 第16-17页 |
| 1.4 我国血液替代品的研究进展 | 第17页 |
| 1.5 本文的研究内容 | 第17-20页 |
| 1.5.1 研究思路 | 第17-18页 |
| 1.5.2 实验方法 | 第18-20页 |
| 1.6 小结 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料与设备 | 第21-29页 |
| 2.1 实验设备和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要试剂盒和试剂 | 第22页 |
| 2.2 主要培养基和溶液的配制 | 第22-25页 |
| 2.2.1 培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.2 核酸电泳与蛋白质电泳 | 第23-24页 |
| 2.2.3 其他重要试剂的配制 | 第24-25页 |
| 2.3 实验生物材料 | 第25-29页 |
| 2.3.1 实验室质粒 | 第25-27页 |
| 2.3.2 实验室使用的菌株 | 第27-29页 |
| 第三章 原核表达载体pHB1的构建 | 第29-45页 |
| 3.1 定点突变血红蛋白 β 亚基基因的获取 | 第29-33页 |
| 3.1.1 引物的设计 | 第29-30页 |
| 3.1.2 血红蛋白 β 亚基基因突变两端基因序列的扩增 | 第30-31页 |
| 3.1.3 回收血红蛋白 β 基因突变位点两端的DNA序列 | 第31-32页 |
| 3.1.4 重叠延伸PCR获取含有突变的血红蛋白 β 亚基基因。 | 第32-33页 |
| 3.2 表达载体pHB1的构建 | 第33-39页 |
| 3.2.1 酶切位点的选择 | 第33-34页 |
| 3.2.2 目的基因的扩增 | 第34-35页 |
| 3.2.3 构建表达载体PHB1 | 第35-38页 |
| 3.2.4 验证是否成功的将血红蛋白 β 亚基基因连上质粒载体pETDuet1 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 定点突变血红蛋白 β 亚基基因克隆结果 | 第39-41页 |
| 3.3.2 构建表达载体pHB1 | 第41-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 ALB-Hα 融合蛋白基因的构建 | 第45-51页 |
| 4.1 ALB- Hα 融合蛋白基因的获取 | 第45-48页 |
| 4.1.1 引物设计 | 第45页 |
| 4.1.2 ALB基因，Hα 基因的扩增 | 第45-47页 |
| 4.1.3 ALB-Hα 融合蛋白基因的扩增 | 第47-48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-51页 |
| 4.2.1 ALB基因，Hα 基因PCR结果 | 第48-49页 |
| 4.2.2 ALB-Hα 融合蛋白基因PCR结果 | 第49-51页 |
| 第五章 重组血红蛋白双表达载体pETDuet1的构建 | 第51-65页 |
| 5.1 双突变ALB-Hβ 基因的获取 | 第52-56页 |
| 5.1.1 三对引物的设计 | 第52页 |
| 5.1.2 突变位点三段基因的扩增 | 第52-55页 |
| 5.1.3 ALB-Hα 基因突变位点 α2 的引入 | 第55页 |
| 5.1.4 ALB-Hα 突变位点 α1 的引入 | 第55-56页 |
| 5.2 将双突变ALB-Hα 基因连入表达载体pHB1中 | 第56-59页 |
| 5.2.1 无缝克隆引物的设计 | 第56-57页 |
| 5.2.2 无缝克隆目的基因的扩增 | 第57-58页 |
| 5.2.3 无缝克隆构建表达载体 | 第58-59页 |
| 5.3 转化构建好的载体并验证是否连接成功 | 第59页 |
| 5.4 结果与分析 | 第59-65页 |
| 5.4.1 双突变ALB-Hα 基因的扩增 | 第59-61页 |
| 5.4.2 无缝克隆在载体中引入双突变ALB-Hα | 第61-62页 |
| 5.4.3 双表达载体测序 | 第62-65页 |
| 第六章 原核重组血红蛋白双表达载体的表达 | 第65-69页 |
| 6.1 将重组血红蛋白双表达载体导入Origami DE3表达菌株中 | 第65页 |
| 6.2 重组血红蛋白双表达载体的表达 | 第65-67页 |
| 6.2.1 原核重组血红蛋白双表达载体pETDuet1的蛋白质诱导表达 | 第65-66页 |
| 6.2.2 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第66-67页 |
| 6.3 结果与分析 | 第67-68页 |
| 6.4 讨论 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 作者简历 | 第79-81页 |
| 学位论文数据集 | 第81页 |
