| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 文献综述 | 第8-19页 |
| 1 转基因玉米的研究现状 | 第8页 |
| 2 昆虫的免疫防卫系统 | 第8-9页 |
| 3 酚氧化酶原激活系统 | 第9-10页 |
| 4 转基因候选基因丝氨酸蛋白酶抑制因子 | 第10-15页 |
| 5 研究目的和意义 | 第15页 |
| 参考文献 | 第15-19页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-30页 |
| 2.1 主要试剂 | 第20页 |
| 2.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 cDNA模板制备 | 第21-22页 |
| 2.4 亚洲玉米螟幼虫Of-Serpin1基因突变体的构建 | 第22-27页 |
| 2.4.1 系统进化树和多重序列比对确定P1位点 | 第22页 |
| 2.4.2 引物设计与合成 | 第22页 |
| 2.4.3 Of-Serpin1四种突变体基因的PCR扩增 | 第22-25页 |
| 2.4.4 目的基因片段的回收纯化 | 第25页 |
| 2.4.5 感受态细胞BL21的制备(CaCl_2法) | 第25页 |
| 2.4.6 Of-Serpin1四种突变体基因与表达载体连接 | 第25-27页 |
| 2.4.7 Of-Serpin1四种突变体基因测序鉴定测序鉴定 | 第27页 |
| 2.5 Of-Serpin1突变体(R、K、F、S)重组蛋白的原核表达 | 第27-30页 |
| 2.5.1 重组表达条件优化 | 第27-28页 |
| 2.5.2 表达的融合蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.5.3 表达蛋白的Western blotting鉴定 | 第29-30页 |
| 2.6 重组表达蛋白Of-Serpin1突变体蛋白的功能分析 | 第30页 |
| 2.6.1 Of-Serpin1的抑制动力学 | 第30页 |
| 2.6.2 不同丝氨酸蛋白酶对重组表达突变体蛋白Of-Serpin1的剪切活性分析 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-53页 |
| 3.1 亚洲玉米螟幼虫Of-Serpinl基因序列分析及P1位点确定 | 第30-33页 |
| 3.1.1 系统进化树和多重序列比对确定P1位点 | 第30-33页 |
| 3.2 亚洲玉米螟幼虫Of-Serpin1突变体基因原核表达载体的构建 | 第33-38页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第33页 |
| 3.2.2 Of-Serpin1四种P1位点突变体基因全长cDNA的克隆 | 第33-35页 |
| 3.2.3 Of-Serpin1突变体PCR产物割胶回收及表达载体构建 | 第35-36页 |
| 3.2.4 Of-Serpin1(P1,R、K、F、S)四种突变体测序鉴定 | 第36-38页 |
| 3.3 四种pET-28b-Of-Serpin1(P1,R、K、F、S)突变体原核表达条件的筛选 | 第38-40页 |
| 3.4 Of-Serpin1突变体(R、K、F、S)重组蛋白的纯化与Western blotting鉴定 | 第40-42页 |
| 3.5 重组表达蛋白Of-Serpin1野生型及突变体蛋白的功能分析 | 第42-53页 |
| 3.5.1 重组表达蛋白Of-Serpin1野生型及其四种突变体(R、K、F、S)蛋白酶动力学分析 | 第42-50页 |
| 3.5.2 不同丝氨酸蛋白酶对重组表达蛋白Of-Serpin1野生型及突变体蛋白的剪切活性分析 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-60页 |
| 4.1 Of-Serpin1野生型和突变体的氨基酸序列和蛋白结构 | 第53-54页 |
| 4.2 Of-Serpin1野生型和突变体蛋白的底物特异性 | 第54-55页 |
| 4.3 Of-Serpin1的原核表达、纯化及Western blotting分析 | 第55-57页 |
| 4.4 Of-Serpin1基因的蛋白功能 | 第57-60页 |
| 4.4.1 体外重组蛋白Of-Serpin1的酶动力学分析 | 第57-58页 |
| 4.4.2 不同丝氨酸蛋白酶对重组表达蛋白Of-Serpin1野生型和四种突变体蛋白的剪切活性分析 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
