| 摘要 | 第1-3页 |
| Summary | 第3-5页 |
| 缩略词表 | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 引言 | 第10页 |
| 2 植物抗寒分子机理研究进展 | 第10-12页 |
| ·抗冻蛋白基因 | 第11页 |
| ·昆虫抗冻蛋白基因 | 第11页 |
| ·植物抗冻蛋白基因 | 第11页 |
| ·与膜结构及其稳定性相关的基因 | 第11页 |
| ·甘油三磷脂酰转移酶 | 第11页 |
| ·脂肪酸去饱和酶 | 第11页 |
| ·与活性氧清除相关的基因 | 第11-12页 |
| ·超氧化物歧化酶 | 第11页 |
| ·过氧化氢酶 | 第11-12页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶 | 第12页 |
| ·谷胱甘肽还原酶 | 第12页 |
| ·胚胎发育晚期富集蛋白基因 | 第12页 |
| 3 CBFS 转录因子研究进展 | 第12-14页 |
| ·CBFs 的鉴定 | 第12页 |
| ·CBFs 基因的结构与特性 | 第12-13页 |
| ·CBFs 基因的调控因子 | 第13-14页 |
| ·正调控因子 | 第13页 |
| ·负调控因子 | 第13-14页 |
| ·CBFs 基因调控的下游基因 | 第14页 |
| ·CBFs 基因调控的生理生化功能 | 第14页 |
| ·CBFs 基因在抗逆条件下的交叉适应现象 | 第14页 |
| 4 植物基因工程常用启动子研究进展 | 第14-16页 |
| ·启动子的概念 | 第14-15页 |
| ·启动子的结构特征 | 第15页 |
| ·TATA 盒 | 第15页 |
| ·转录起始点 | 第15页 |
| ·CAAT 盒 | 第15页 |
| ·GC 盒 | 第15页 |
| ·启动子的类型 | 第15-16页 |
| ·组成型启动子 | 第15页 |
| ·诱导型启动子 | 第15-16页 |
| ·组织或器官特异型启动子 | 第16页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 不同葡萄CBF_1基因片段的克隆及序列分析 | 第17-39页 |
| 1 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与试剂 | 第18-20页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·载体及菌株 | 第18页 |
| ·实验药品 | 第18页 |
| ·实验仪器与设备 | 第18页 |
| ·主要试剂溶液及培养基的配制 | 第18-20页 |
| 3 实验方法 | 第20-26页 |
| ·五种葡萄基因组DNA 的提取及浓度检测 | 第20-22页 |
| ·五种葡萄基因组DNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·检测DNA 的质量与纯度 | 第21-22页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第22页 |
| ·引物设计与合成 | 第22页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第22页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第22-23页 |
| ·目的片段与pMD18-T 载体连接 | 第23页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第24页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第24-25页 |
| ·重组质粒PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第25页 |
| ·序列测定及生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 4 结果与分析 | 第26-36页 |
| ·葡萄基因组DNA 质量分析 | 第26页 |
| ·CBF_1 基因的PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·CBF_1 基因阳性克隆鉴定 | 第27-28页 |
| ·CBF_1 基因序列的生物信息学分析 | 第28-36页 |
| ·CBF_1 基因的核苷酸序列分析 | 第28-33页 |
| ·CBF_1 基因的氨基酸序列分析 | 第33页 |
| ·CBF_1 一级结构及理化性质分析 | 第33-34页 |
| ·氨基酸序列疏水性/亲水性预测和分析 | 第34-35页 |
| ·氨基酸序列信号肽的预测和分析 | 第35页 |
| ·氨基酸序列跨膜结构域分析 | 第35-36页 |
| 5 讨论 | 第36-39页 |
| ·葡萄基因组DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第37页 |
| ·PCR 反应体系的优化 | 第37-38页 |
| ·测序 | 第38-39页 |
| 第三章 植物表达载体构建 | 第39-48页 |
| 1 技术路线 | 第39-40页 |
| 2 材料与试剂 | 第40-41页 |
| ·质粒与菌株 | 第40页 |
| ·实验药品 | 第40页 |
| ·实验仪器与设备 | 第40页 |
| ·主要试剂溶液及培养基的配制 | 第40-41页 |
| 3 实验方法 | 第41-44页 |
| ·目的基因的制备 | 第41-43页 |
| ·摇菌 | 第41-42页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第42页 |
| ·CBF_1 片段的PCR 扩增 | 第42页 |
| ·目的片段的回收 | 第42页 |
| ·质粒pMD18-CBF_1 双酶切 | 第42-43页 |
| ·载体的制备 | 第43页 |
| ·摇菌 | 第43页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第43页 |
| ·质粒pBI121 双酶切 | 第43页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第43页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-45页 |
| ·目的基因和载体的准备 | 第44页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-48页 |
| ·PCR 引物中引入酶切位点 | 第45-46页 |
| ·植物表达载体的选择 | 第46页 |
| ·DNA 连接酶的选择 | 第46页 |
| ·双酶切反应 | 第46页 |
| ·连接反应 | 第46-48页 |
| 第四章 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 导师简介 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-60页 |