| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 松材线虫发育生物学研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 HOX家族及lin-39 基因调控生物生长发育研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 RNAi的研究原理及应用 | 第13-14页 |
| 1.4 线虫基因时空表达调控研究 | 第14-17页 |
| 1.4.1 原位杂交技术 | 第14-15页 |
| 1.4.2 转基因技术 | 第15-17页 |
| 2 试验材料与方法 | 第17-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 供试线虫 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂与工具酶 | 第17页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第17页 |
| 2.1.5 所用培养基 | 第17-18页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-34页 |
| 2.2.1 松材线虫的培养与分离 | 第18页 |
| 2.2.2 同步发育的不同龄期松材线虫的获得 | 第18-19页 |
| 2.2.2.1 松材线虫卵的获得 | 第18页 |
| 2.2.2.2 不同龄期线虫幼虫的获得 | 第18-19页 |
| 2.2.3 松材线虫lin-39 基因克隆 | 第19-21页 |
| 2.2.3.1 松材线虫总RNA提取 | 第19页 |
| 2.2.3.2 松材线虫RNA检测 | 第19页 |
| 2.2.3.3 RNA反转录 | 第19-20页 |
| 2.2.3.4 PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.4 松材线虫lin-39 基因的表达定位研究 | 第21-26页 |
| 2.2.4.1 原位杂交探针制备 | 第21-23页 |
| 2.2.4.2 线虫初步固定 | 第23-24页 |
| 2.2.4.3 线虫固定 | 第24-25页 |
| 2.2.4.4 杂交反应 | 第25页 |
| 2.2.4.5 清洗 | 第25页 |
| 2.2.4.6 染色 | 第25-26页 |
| 2.2.4.7 线虫的固定及拍照 | 第26页 |
| 2.2.5 松材线虫lin-39 基因RNAi功能验证 | 第26-30页 |
| 2.2.5.1 lin-39 基因干扰片段dsRNA的制备 | 第26-28页 |
| 2.2.5.2 RNAi浸泡形态学差异试验 | 第28页 |
| 2.2.5.3 RNAi浸泡行为学差异试验 | 第28-30页 |
| 2.2.6 松材线虫lin-39 基因不同发育阶段qPCR分析 | 第30-31页 |
| 2.2.6.1 各龄期松材线虫RNA样品的获得 | 第30页 |
| 2.2.6.2 qPCR的模板制备 | 第30页 |
| 2.2.6.3 lin-39 基因不同发育阶段qPCR分析 | 第30-31页 |
| 2.2.7 松材线虫lin-39 基因在秀丽隐杆线虫体内的转基因表达 | 第31-34页 |
| 2.2.7.1 基于lin-39 基因启动子表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.7.2 lin-39 重组表达载体在秀丽隐杆线虫体内的转基因表达 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-48页 |
| 3.1 松材线虫lin-39 基因的生物信息学分析 | 第34-37页 |
| 3.2 松材线虫lin-39 基因的表达研究 | 第37-44页 |
| 3.2.1 in situ原位杂交 | 第37-38页 |
| 3.2.2 松材线虫lin-39 基因在秀丽隐杆线虫体内的转基因表达 | 第38-42页 |
| 3.2.2.0 lin-39 基因携带mcherry的转基因表达载体的构建 | 第38页 |
| 3.2.2.1 lin-39 基因启动子区域扩增 | 第38-39页 |
| 3.2.2.2 PCFJ90载体片段扩增 | 第39页 |
| 3.2.2.3 in-fusion融合 | 第39-40页 |
| 3.2.2.4 转基因秀丽隐杆线虫后代荧光观察 | 第40-42页 |
| 3.2.3 荧光实时定量PCR | 第42-44页 |
| 3.2.3.1 不同龄期松材线虫RNA样品的获得 | 第42页 |
| 3.2.3.2 lin-39 基因不同龄期表达的qPCR检测结果 | 第42-44页 |
| 3.3 松材线虫lin-39 基因RNAi功能验证 | 第44-48页 |
| 3.3.1 lin-39 基因干扰片段dsRNA的获得 | 第44-45页 |
| 3.3.2 松材线虫lin-39 基因RNAi功能验证 | 第45-46页 |
| 3.3.3 松材线虫lin-39 基因RNAi行为学研究 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 松材线虫lin-39 基因的进化分析 | 第48-49页 |
| 4.2 松材线虫lin-39 基因功能分析 | 第49-50页 |
| 4.3 松材线虫lin-39 基因对阴户发育的作用 | 第50-52页 |
| 5 结论与展望 | 第52-54页 |
| 5.1 结论 | 第52页 |
| 5.2 展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 个人简介 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
