| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-26页 |
| ·杀虫蛋白晶体蛋白的分类 | 第14-15页 |
| ·Cry杀虫晶体蛋白 | 第15-16页 |
| ·Cry杀虫晶体蛋白的晶体结构 | 第16-18页 |
| ·Domain Ⅰ | 第16-17页 |
| ·Domain Ⅱ | 第17页 |
| ·Domain Ⅲ | 第17-18页 |
| ·Cry杀虫晶体蛋白杀虫机制 | 第18-20页 |
| ·Bravo模型 | 第18-19页 |
| ·Zhang模型 | 第19-20页 |
| ·Jurat-Fuentes模型 | 第20页 |
| ·Cry9类蛋白 | 第20-21页 |
| ·Vip杀虫蛋白 | 第21-22页 |
| ·Vip杀虫蛋白的分类与特性 | 第21-22页 |
| ·Vip3A蛋白的杀虫机理研究 | 第22页 |
| ·协同增效 | 第22-24页 |
| ·Cry蛋白之间的增效 | 第22-23页 |
| ·Cyt蛋白与Cry蛋白之间的增效 | 第23页 |
| ·Vip3A蛋白与Cry蛋白之间的增效 | 第23页 |
| ·Zwittermicin A与Bt的增效 | 第23-24页 |
| ·辅助蛋白与Bt的增效 | 第24页 |
| ·几丁质酶与Bt的增效 | 第24页 |
| ·增效机制假说 | 第24页 |
| ·水稻二化螟 | 第24-26页 |
| 2 引言 | 第26-27页 |
| ·研究目的意义 | 第26页 |
| ·主要研究内容 | 第26-27页 |
| 3 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·菌株与载体 | 第27-28页 |
| ·培养基与抗生素 | 第28页 |
| ·酶与生化试剂 | 第28页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第28-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·供试昆虫 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-37页 |
| ·模板制备 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·BP反应 | 第32页 |
| ·PCR和载体酶切产物的纯化 | 第32页 |
| ·DNA片段的连接 | 第32页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌TG1/ET/DH5α热激感受态细胞的制备及转化 | 第33页 |
| ·苏云金芽胞杆菌电击所需感受态细胞的制备与转化 | 第33页 |
| ·大肠杆菌蛋白的提取 | 第33-34页 |
| ·带组氨酸标签蛋白的Ni柱纯化 | 第34页 |
| ·透析 | 第34页 |
| ·蛋白定量 | 第34页 |
| ·亚洲玉米螟的生测方法 | 第34-35页 |
| ·小菜蛾的生测方法 | 第35页 |
| ·水稻二化螟生测方法 | 第35页 |
| ·原毒素对蛋白酶以及中肠消化液敏感性、稳定性分析 | 第35页 |
| ·蛋白的离子交换纯化 | 第35页 |
| ·水稻二化螟的中肠的BBMV的提取 | 第35-36页 |
| ·活化毒素CNBr偶联 | 第36页 |
| ·配体的垂钓过程 | 第36-37页 |
| 4. 结果与分析 | 第37-79页 |
| ·Cry9Aa蛋白的改造 | 第37-57页 |
| ·pHT1A-cry9AaAc载体构建 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白Cry9AaAc的表达分析 | 第38-39页 |
| ·Cry9Aa蛋白的信息学分析 | 第39-41页 |
| ·截短引物的设计 | 第41页 |
| ·截短片段的性质分析 | 第41-43页 |
| ·重组载体pEB-cry9Aa的构建和PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·截短蛋白的表达分析 | 第44-46页 |
| ·对小菜蛾的生物活性的初筛 | 第46-47页 |
| ·对亚洲玉米螟的生物活性的初筛 | 第47-49页 |
| ·对小菜蛾和亚洲玉米螟的生物活性的复筛 | 第49-57页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa蛋白的纯化 | 第57-64页 |
| ·盐和咪唑浓度对C-9Aa纯化的影响 | 第57-58页 |
| ·盐浓度和pH值对Cry9Aa蛋白寡聚化的影响 | 第58-61页 |
| ·透析处理的样品对小菜蛾的生测 | 第61-63页 |
| ·寡聚体对胰蛋白酶稳定性分析 | 第63页 |
| ·pH值上样缓冲液对Vip3Aa离子交换纯化的影响 | 第63-64页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa活性区N端酶解断裂点分析 | 第64-69页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa蛋白对蛋白酶和中肠液稳定性分析 | 第64-66页 |
| ·Cry9Aa蛋白和Vip3Aa蛋白活化毒素活性验证 | 第66-67页 |
| ·Cry9Aa蛋白和Vip3Aa蛋白活化毒素的酶解位点分析 | 第67-69页 |
| ·增效验证 | 第69-79页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa蛋白对水稻二化螟的初筛 | 第69-70页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa蛋白对水稻二化螟的复筛 | 第70-72页 |
| ·蛋白偶联 | 第72页 |
| ·水稻二化螟BBMV的制备 | 第72-73页 |
| ·Cry9Aa蛋白和Vip3Aa蛋白在水稻二化螟BBMV上结合蛋白的分析 | 第73-79页 |
| 5. 讨论 | 第79-81页 |
| ·Cry9Aa蛋白的改造 | 第79页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa蛋白的纯化 | 第79页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa蛋白N端断裂点分析 | 第79-80页 |
| ·Cry9Aa和Vip3Aa蛋白的增效效果验证和机理初探 | 第80-81页 |
| 6 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文目录 | 第95页 |
