| 摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-36页 |
| ·旋毛虫病和与旋毛虫 | 第15-16页 |
| ·丝氨酸蛋白酶概况 | 第16-18页 |
| ·蛋白酶及其分类 | 第16-17页 |
| ·丝氨酸蛋白酶及其分类 | 第17页 |
| ·丝氨酸蛋白酶研究概况 | 第17-18页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂概况 | 第18-29页 |
| ·蛋白酶抑制剂概况 | 第18页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂概况 | 第18-19页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂种类 | 第19页 |
| ·各种丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构和作用机制 | 第19-29页 |
| ·寄生虫中丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第29-34页 |
| ·旋毛虫中丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第30页 |
| ·旋盘尾丝虫中丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第30页 |
| ·捻转血矛线虫中丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第30-31页 |
| ·马来丝虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第31页 |
| ·透明毛圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第31页 |
| ·蛔虫属丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第31-32页 |
| ·单纯异尖线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第32页 |
| ·犬钩虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第32-33页 |
| ·猪鞭虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第33页 |
| ·血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第33-34页 |
| ·华支睾吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第34页 |
| ·肺吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第34页 |
| ·棘球蚴属丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第34页 |
| ·研究目的与意义 | 第34-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-48页 |
| ·试验材料 | 第36-38页 |
| ·虫株与实验动物 | 第36页 |
| ·菌株与载体 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·主要软件 | 第37-38页 |
| ·试验方法 | 第38-48页 |
| ·生物信息学分析 | 第38页 |
| ·三种重组蛋白的表达及纯化 | 第38-42页 |
| ·三种蛋白酶最佳使用浓度的测定 | 第42页 |
| ·三种蛋白酶相关参数的测定 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶和胃蛋白酶抑制活性检测 | 第43页 |
| ·三种蛋白对其他丝氨酸蛋白酶抑制活性的检测 | 第43-44页 |
| ·不同温度对重组蛋白抑制活性的影响 | 第44页 |
| ·抑制剂活性位点的鉴定 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR方法测定三种丝氨酸蛋白酶抑制剂在虫体内的表达量 | 第45-46页 |
| ·Western blot方法测定三种丝氨酸蛋白酶抑制剂在虫体内的表达量 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-112页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第48-62页 |
| ·基因序列分析结果 | 第48-49页 |
| ·基本理化性质分析结果 | 第49-51页 |
| ·跨膜区分析结果 | 第51-53页 |
| ·信号肽的预测 | 第53-54页 |
| ·二级结构的分析 | 第54-55页 |
| ·结构域的比较分析 | 第55-58页 |
| ·进化分析结果 | 第58-62页 |
| ·虫体RNA的提取及反转录 | 第62页 |
| ·基因克隆 | 第62-64页 |
| ·Tsp03044基因的扩增 | 第62页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第62-64页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第64-72页 |
| ·蛋白的表达及可溶性分析 | 第64-66页 |
| ·IPTG诱导浓度和诱导温度的优化 | 第66-71页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第71-72页 |
| ·酶最佳使用浓度的测定 | 第72-74页 |
| ·胰蛋白酶最佳使用浓度的测定 | 第72-73页 |
| ·α-糜蛋白酶最佳使用浓度的测定 | 第73页 |
| ·胃蛋白酶最佳使用浓度的测定 | 第73-74页 |
| ·蛋白酶酶促反应相关参数的测定 | 第74-79页 |
| ·胰蛋白酶酶促反应相关参数值的测定 | 第74-76页 |
| ·α-糜蛋白酶酶促反应相关参数值的测定 | 第76-77页 |
| ·胃蛋白酶酶促反应相关参数值的测定 | 第77-79页 |
| ·重组蛋白抑制活性检测 | 第79-92页 |
| ·三种重组蛋白对胰蛋白酶抑制活性的测定 | 第79-83页 |
| ·三种重组蛋白对α-糜蛋白酶抑制活性的测定 | 第83-87页 |
| ·三种重组蛋白对胃蛋白酶抑制活性的测定 | 第87-91页 |
| ·三种蛋白对其他丝氨酸蛋白酶抑制活性检测 | 第91-92页 |
| ·不同温度对重组蛋白抑制活性的影响 | 第92-94页 |
| ·不同温度下Tsp03044对胰蛋白酶活性抑制影响的测定 | 第92-93页 |
| ·不同温度下Tsp03044对α-糜蛋白酶活性抑制影响的测定 | 第93-94页 |
| ·不同温度下TspAd5对α-糜蛋白酶活性抑制影响的测定 | 第94页 |
| ·三种抑制剂活性位点突变检测 | 第94-109页 |
| ·三种突变蛋白重组质粒的构建 | 第94-99页 |
| ·三种突变蛋白的表达及纯化 | 第99-101页 |
| ·三种突变蛋白对丝氨酸蛋白酶的抑制作用分析结果 | 第101-109页 |
| ·Real-time PCR方法检测三种丝氨酸蛋白酶抑制剂在虫体内表达量 | 第109-110页 |
| ·引物工作效率测定 | 第109-110页 |
| ·三种基因在旋毛虫生活周期表达情况检测 | 第110页 |
| ·Western blot方法检测三种蛋白在旋毛虫体内的表达情况 | 第110-112页 |
| 4 讨论 | 第112-116页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第112页 |
| ·基因的原核表达 | 第112-113页 |
| ·重组蛋白对蛋白酶活性抑制检测 | 第113-114页 |
| ·不同温度对重组蛋白抑制活性的影响 | 第114页 |
| ·三种抑制剂活性位点突变检测 | 第114-115页 |
| ·三种丝氨酸蛋白酶抑制剂在虫体内表达的检测 | 第115-116页 |
| 5 结论 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第129页 |
