| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 主要符号对照表 | 第11-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-25页 |
| ·RNA元件与基因表达调控 | 第14页 |
| ·核糖开关与核酶核糖开关 | 第14-17页 |
| ·核糖开关 | 第14-15页 |
| ·核酶 | 第15页 |
| ·核酶核糖开关 | 第15-17页 |
| ·复合型核酶开关 | 第17-18页 |
| ·本文的研究思路 | 第18-25页 |
| ·HTRS-1 核酶开关及其非病毒载体的设计与构建 | 第21-22页 |
| ·HTRS-1 核酶开关活性的检测 | 第22页 |
| ·HTRS-1 核酶开关通用性的检测 | 第22页 |
| ·HTRS-1 核酶开关的改造及活性检测 | 第22-23页 |
| ·HTRS-1 核酶开关在r AAV载体中的应用 | 第23-25页 |
| 第2章 携带HTRS-1 核酶开关的非病毒载体的构建 | 第25-35页 |
| ·实验材料与仪器 | 第25-27页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·实验仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·HTRS-1 核酶开关实验组及其对照组的构建 | 第27-28页 |
| ·psi CHECK2Gluc系列重组质粒的构建 | 第28-33页 |
| ·主要试剂的配制 | 第33页 |
| ·实验结果与分析 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第3章 HTRS-1 核酶开关调控转基因表达的性能 | 第35-53页 |
| ·实验材料与仪器 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的转染 | 第38-40页 |
| ·RNA水平上核酶活性的检测 | 第40-42页 |
| ·蛋白质水平上HTRS-1 核酶核糖开关性能的检测 | 第42-43页 |
| ·茶碱对细胞的毒性作用的检测 | 第43-44页 |
| ·HPLC法检测茶碱在细胞内的含量 | 第44-45页 |
| ·实验结果与分析 | 第45-52页 |
| ·质粒瞬时转染的优化条件 | 第45页 |
| ·配体对核酶剪切活性的调控作用 | 第45-46页 |
| ·配体对核酶开关的调控作用 | 第46-47页 |
| ·HTRS-1 核酶开关的性能参数 | 第47-48页 |
| ·茶碱对细胞的毒性影响 | 第48-49页 |
| ·茶碱在细胞中的含量 | 第49-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第4章 HTRS-1 核酶开关的通用性 | 第53-65页 |
| ·实验材料与仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-61页 |
| ·以Kal为转基因的重组质粒载体的构建 | 第54-57页 |
| ·重组质粒的转染及核酶开关调控性能的检测 | 第57-59页 |
| ·主要试剂的配制 | 第59-61页 |
| ·实验结果与分析 | 第61-63页 |
| ·重组质粒的验证 | 第61-62页 |
| ·HTRS-1 核酶开关Kal的调控 | 第62页 |
| ·HTRS-1 核酶开关的细胞环境通用性 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第5章 HTRS-1 核酶开关的改造 | 第65-81页 |
| ·实验材料与仪器 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·实验仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-72页 |
| ·HTRS-1 核酶开关的改造 | 第66-71页 |
| ·改造后核酶开关调控性能的检测 | 第71页 |
| ·主要试剂的配制 | 第71-72页 |
| ·实验结果与分析 | 第72-78页 |
| ·定点突变HTRSM-1 核酶核开关的验证结果 | 第72-73页 |
| ·HTRSM-1 开关的调控性能 | 第73-74页 |
| ·复合型核酶开关重组质粒的验证结果 | 第74-76页 |
| ·不同插入位点核酶开关的调控性能 | 第76-78页 |
| ·串联核酶开关的调控性能 | 第78页 |
| ·本章小结 | 第78-81页 |
| 第6章 HTRS-1 核酶开关在r AAV载体中的应用 | 第81-91页 |
| ·实验材料与仪器 | 第81-82页 |
| ·实验方法 | 第82-86页 |
| ·主要试剂的配制 | 第82-83页 |
| ·r AAV载体的制备 | 第83-85页 |
| ·使用r AAV载体将核酶开关导入哺乳动物细胞 | 第85页 |
| ·核酶开关调控小鼠体内转基因的表达 | 第85-86页 |
| ·实验数据的计算 | 第86页 |
| ·实验结果与分析 | 第86-89页 |
| ·ss AAV-Kal-H10/AR重组质粒的验证 | 第86-87页 |
| ·重组质粒载体上核酶开关的活性 | 第87-88页 |
| ·r AAV介导的HTRS-1 核酶开关的调控性能 | 第88-89页 |
| ·本章小结 | 第89-91页 |
| 总结 | 第91-94页 |
| 附录 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第103页 |
