| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-26页 |
| 前言 | 第26-30页 |
| 第一章 构建体外皮质神经元糖氧剥夺/复糖复氧模型确定亚低温治疗方案 | 第30-49页 |
| ·背景 | 第30-32页 |
| ·伦理学声明 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-40页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·实验试剂 | 第32-34页 |
| ·实验材料及器具 | 第34页 |
| ·实验设备 | 第34-35页 |
| ·试剂配制及分装 | 第35-36页 |
| ·多聚赖氨酸包被 | 第36页 |
| ·原代神经元培养 | 第36-37页 |
| ·免疫组化染色鉴定神经元细胞 | 第37-38页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡率 | 第38页 |
| ·筛选糖氧剥夺/复糖复氧条件 | 第38-39页 |
| ·亚低温条件筛选 | 第39-40页 |
| ·统计分析 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-47页 |
| ·原代皮质神经元细胞鉴定及阳性率检测 | 第40-42页 |
| ·糖氧剥夺时间筛选 | 第42-44页 |
| ·不同亚低温水平和时程对OGD/R后原代皮质神经元细胞调亡率的影响 | 第44-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 第二章 体外重度糖氧剥夺/复糖复氧皮质神经元模型筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂 | 第49-96页 |
| ·背景 | 第49-56页 |
| ·材料和方法 | 第56-64页 |
| ·药物及试剂 | 第56-57页 |
| ·材料和设备 | 第57-58页 |
| ·试剂配制 | 第58-61页 |
| ·CCK-8检测细胞活力 | 第61页 |
| ·制作神经元细胞的标准曲线 | 第61-62页 |
| ·筛选药物在常温的最佳浓度 | 第62页 |
| ·CCK-8筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂 | 第62-63页 |
| ·ANEXIN V/PI双染流式细胞仪检测法检测细胞早期和晚期凋亡率,筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂 | 第63-64页 |
| ·统计分析 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-89页 |
| ·神经元细胞标准曲线 | 第64-65页 |
| ·筛选神经保护剂的最佳浓度 | 第65-71页 |
| ·不同药物联合亚低温治疗对OGD/R后原代皮质神经元细胞活力变化率的影响 | 第71-84页 |
| ·药物与亚低温联用时对OGD瓜后原代皮质神经元细胞总体凋亡率的影响 | 第84-89页 |
| ·讨论 | 第89-95页 |
| ·结论 | 第95-96页 |
| 第三章 HUK、Ngb、MK-801与亚低温联用对缺血级联的关键环节的保护作用 | 第96-125页 |
| ·缺血性卒中神经保护靶点 | 第96-100页 |
| ·材料和方法 | 第100-111页 |
| ·试剂 | 第100-102页 |
| ·材料 | 第102页 |
| ·设备 | 第102页 |
| ·试剂配制 | 第102-104页 |
| ·分组及处理 | 第104-105页 |
| ·检测方法 | 第105-111页 |
| ·统计分析方法 | 第111页 |
| ·结果 | 第111-122页 |
| ·JC-1检测线粒体膜电位 | 第111-114页 |
| ·DCF-DA检测细胞内ROS生成 | 第114-116页 |
| ·FLUO-3 AM Ester检测细胞内钙离子([Ca]i)生成 | 第116-119页 |
| ·DAF-FM DA检测细胞内NO生成 | 第119-121页 |
| ·Western Blotting检测caspase 3表达 | 第121-122页 |
| ·讨论 | 第122-124页 |
| ·结论 | 第124-125页 |
| 小结 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-142页 |
| 附录 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 附件 | 第146页 |
