| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 1 绪论 | 第14-32页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·松材线虫病简介 | 第14-19页 |
| ·松材线虫病的历史和发展 | 第14-15页 |
| ·松材线虫病传播途径 | 第15页 |
| ·松材线虫病侵染循环 | 第15-16页 |
| ·松材线虫病病原 | 第16-17页 |
| ·松材线虫病致病机理 | 第17-19页 |
| ·松材线虫病防控措施 | 第19页 |
| ·寄主松树响应松材线虫侵染的特征事件 | 第19-22页 |
| ·细胞程序化死亡(PCD) | 第20页 |
| ·萜烯类物质含量变化 | 第20-21页 |
| ·水势变化 | 第21页 |
| ·空洞化现象 | 第21-22页 |
| ·植物寄生线虫致病基因研究进展 | 第22-26页 |
| ·植物寄生线虫食道腺分泌物的作用 | 第22页 |
| ·植物寄生线虫致病相关基因克隆 | 第22-24页 |
| ·松材线虫致病基因研究进展 | 第24-25页 |
| ·类毒液过敏原蛋白(VAP)基因 | 第25-26页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第26-28页 |
| ·杆状病毒表达系统优缺点 | 第26-27页 |
| ·Bac to Bac表达系统原理 | 第27-28页 |
| ·研究目的和意义 | 第28-29页 |
| ·研究的主要内容 | 第29-31页 |
| ·研究的技术路线 | 第31页 |
| ·课题来源 | 第31-32页 |
| 2 松材线虫Bx-vap-1基因的克隆及在昆虫细胞中的表达 | 第32-57页 |
| ·材料与方法 | 第32-47页 |
| ·试验虫株 | 第32页 |
| ·昆虫细胞株 | 第32页 |
| ·试剂盒 | 第32页 |
| ·生物试剂 | 第32-33页 |
| ·培养基制备 | 第33页 |
| ·松材线虫Bx-vap-1基因克隆 | 第33-38页 |
| ·构建重组杆状病毒Bacmid-vap | 第38-42页 |
| ·Bx-vap-1基因在昆虫细胞中的表达 | 第42-44页 |
| ·VAP蛋白纯化与检测 | 第44-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-55页 |
| ·松材线虫总RNA提取 | 第47-48页 |
| ·Bx-vap-1基因克隆 | 第48-49页 |
| ·构建重组转移载体pFastBac-vap | 第49-50页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid-vap鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组杆状病毒转染Sf9昆虫细胞 | 第51-52页 |
| ·重组杆状病毒扩增条件优化 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot分析 | 第53-54页 |
| ·VAP蛋白定量分析 | 第54-55页 |
| ·讨论与小结 | 第55-57页 |
| ·蛋白表达系统的选择 | 第55页 |
| ·影响蛋白表达的因素 | 第55-57页 |
| 3 RACE技术克隆马尾松α-蒎烯合成酶基因cDNA全长 | 第57-65页 |
| ·材料与方法 | 第57-59页 |
| ·试验材料 | 第57页 |
| ·马尾松总RNA提取 | 第57页 |
| ·引物序列 | 第57页 |
| ·马尾松cDNA第一链的合成和α-蒎烯合成酶基因中间片段扩增 | 第57-58页 |
| ·3’RACE | 第58页 |
| ·5’RACE | 第58-59页 |
| ·序列拼接和全长扩增 | 第59页 |
| ·马尾松α-蒎烯合成酶基因序列分析 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-63页 |
| ·马尾松总RNA提取 | 第59-60页 |
| ·α-蒎烯合成酶基因全长cDNA的克隆 | 第60-61页 |
| ·α-蒎烯合成酶基因序列分析 | 第61页 |
| ·α-蒎烯合成酶基因同源性分析 | 第61-63页 |
| ·讨论与小结 | 第63-65页 |
| 4 马尾松α-蒎烯合成酶基因表达规律和α-蒎烯含量变化 | 第65-73页 |
| ·材料与方法 | 第65-67页 |
| ·试验虫株 | 第65页 |
| ·试验松树 | 第65页 |
| ·接种与取材 | 第65-66页 |
| ·马尾松总RNA提取和反转录 | 第66页 |
| ·Real-time PCR检测马尾松α-蒎烯合成酶基因表达 | 第66页 |
| ·Real-time PCR扩增特异性分析 | 第66页 |
| ·α-蒎烯的提取方法 | 第66-67页 |
| ·气相色谱法检测α-蒎烯蒎烯含量 | 第67页 |
| ·数据统计与分析 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-71页 |
| ·Real-time PCR扩增特异性分析 | 第67-69页 |
| ·接种后α-蒎烯合成酶基因的表达规律 | 第69-70页 |
| ·马尾松α-蒎烯含量的变化规律 | 第70-71页 |
| ·讨论与小结 | 第71-73页 |
| ·试验设计 | 第71页 |
| ·接种后寄主松树防御反应特征 | 第71-73页 |
| 5 接种后马尾松组织病理学变化 | 第73-85页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·试验材料 | 第73页 |
| ·接种和取材 | 第73页 |
| ·马尾松接种茎段表观观察 | 第73页 |
| ·细胞学观察 | 第73-74页 |
| ·空洞化现象观察 | 第74-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-82页 |
| ·马尾松接种茎段表观病理学观察 | 第75-76页 |
| ·细胞学观察 | 第76-82页 |
| ·空洞化现象观察 | 第82页 |
| ·讨论与小结 | 第82-85页 |
| ·细胞程序化死亡 | 第82-83页 |
| ·嗜饿滴的积累 | 第83页 |
| ·髓部褐变与空洞化现象 | 第83-85页 |
| 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
