摘要 | 第1-4页 |
Summary | 第4-6页 |
缩略语表 | 第6-7页 |
目录 | 第7-9页 |
第一章 绪论 | 第9-22页 |
1 鸡传染性法氏囊病及其病毒概述 | 第9-15页 |
·鸡传染性法氏囊病(IBD)的流行历史及经济影响 | 第9-11页 |
·鸡法氏囊病毒的病原学 | 第11-13页 |
·IBDV 的血清型 | 第13页 |
·IBD 防治中所面临的问题 | 第13-14页 |
·重组活载体疫苗在防治 IBD 中的前景与展望 | 第14-15页 |
2 火鸡疱疹病毒(HVT)概述 | 第15-18页 |
·HVT 与 MDV | 第15-16页 |
·HVT 的基因组结构与病原学特征 | 第16-17页 |
·HVT 功能基因组学 | 第17-18页 |
3. 本研究中利用的两种重要的克隆技术概述 | 第18-22页 |
·Red/ET 同源重组技术概述 | 第18-20页 |
·GatewayLR 重组技术概述 | 第20-22页 |
第二章 携带 IBDV VP2 基因的入门载体 pENTR-VP2 的构建 | 第22-29页 |
1 材料与方法 | 第22-25页 |
·材料 | 第22-23页 |
·引物的设计与合成 | 第23页 |
·IBDV VP2 基因的提取及与真核表达载体 pCAGGs 的连接 | 第23-25页 |
2 结果 | 第25-27页 |
·pCAGG-VP2 重组质粒的 PCR 扩增鉴定和双酶切鉴定 | 第25-26页 |
·携带 VP2 基因表达盒的入门质粒 pENTR-VP2 的 PCR 扩增和双酶切鉴定 | 第26-27页 |
3.讨论 | 第27-29页 |
第三章 重组病毒 rHVT-VP2 的构建 | 第29-37页 |
1 材料与方法 | 第29-33页 |
·材料 | 第29-30页 |
·Fosmid 文库构建概要 | 第30页 |
·目的载体 5354 ccdBK+的构建 | 第30-31页 |
·5354-VP2 重组黏粒的获得 | 第31-33页 |
2 结果 | 第33-34页 |
·目标载体 5354 ccdBK+克隆的菌液 PCR 鉴定 | 第33页 |
·5354VP2 的 PCR 鉴定 | 第33-34页 |
3 讨论 | 第34-37页 |
第四章 重组病毒的拯救与鉴定 | 第37-47页 |
1 材料与方法 | 第37-41页 |
·材料 | 第37-38页 |
·转染黏粒片段的制备 | 第38页 |
·转染原代 CEF 细胞 | 第38-39页 |
·病毒的传代 | 第39-40页 |
·重组病毒的鉴定 | 第40-41页 |
2 结果 | 第41-45页 |
·五个黏粒片段转染前的酶切鉴定 | 第41-42页 |
·重组病毒的 PCR 鉴定 | 第42-43页 |
·VP2 表达的 Western-blot 检测 | 第43页 |
·VP2 表达的 IFA 检测 | 第43-44页 |
·重组病毒在体外生长特性的测定 | 第44-45页 |
3 讨论 | 第45-47页 |
·转染方法的选择 | 第45页 |
·重组病毒 rHVT-VP2 具备优良的遗传稳定性 | 第45-47页 |
第五章 IBDV 超强毒株攻毒 SPF 鸡免疫保护实验分析 | 第47-53页 |
1 材料和方法 | 第47-49页 |
·材料 | 第47页 |
·免疫疫苗及攻读病毒的准备 | 第47-48页 |
·重组病毒 vvIBDV 攻毒免疫保护实验 | 第48页 |
·试验鸡血清抗体水平检测 | 第48-49页 |
·眼观剖检病变观察 | 第49页 |
2 结果 | 第49-51页 |
·试验鸡血清抗体的检测 | 第49页 |
·攻毒保护试验 | 第49-51页 |
3 讨论 | 第51-53页 |
全文总结 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
作者简介 | 第65-66页 |
导师简介 | 第66-67页 |