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表达IBDVvp2蛋白的rHVT的构建及其免疫保护评价

摘要第1-4页
Summary第4-6页
缩略语表第6-7页
目录第7-9页
第一章 绪论第9-22页
 1 鸡传染性法氏囊病及其病毒概述第9-15页
   ·鸡传染性法氏囊病(IBD)的流行历史及经济影响第9-11页
   ·鸡法氏囊病毒的病原学第11-13页
   ·IBDV 的血清型第13页
   ·IBD 防治中所面临的问题第13-14页
   ·重组活载体疫苗在防治 IBD 中的前景与展望第14-15页
 2 火鸡疱疹病毒(HVT)概述第15-18页
   ·HVT 与 MDV第15-16页
   ·HVT 的基因组结构与病原学特征第16-17页
   ·HVT 功能基因组学第17-18页
 3. 本研究中利用的两种重要的克隆技术概述第18-22页
   ·Red/ET 同源重组技术概述第18-20页
   ·GatewayLR 重组技术概述第20-22页
第二章 携带 IBDV VP2 基因的入门载体 pENTR-VP2 的构建第22-29页
 1 材料与方法第22-25页
   ·材料第22-23页
   ·引物的设计与合成第23页
   ·IBDV VP2 基因的提取及与真核表达载体 pCAGGs 的连接第23-25页
 2 结果第25-27页
   ·pCAGG-VP2 重组质粒的 PCR 扩增鉴定和双酶切鉴定第25-26页
   ·携带 VP2 基因表达盒的入门质粒 pENTR-VP2 的 PCR 扩增和双酶切鉴定第26-27页
 3.讨论第27-29页
第三章 重组病毒 rHVT-VP2 的构建第29-37页
 1 材料与方法第29-33页
   ·材料第29-30页
   ·Fosmid 文库构建概要第30页
   ·目的载体 5354 ccdBK+的构建第30-31页
   ·5354-VP2 重组黏粒的获得第31-33页
 2 结果第33-34页
   ·目标载体 5354 ccdBK+克隆的菌液 PCR 鉴定第33页
   ·5354VP2 的 PCR 鉴定第33-34页
 3 讨论第34-37页
第四章 重组病毒的拯救与鉴定第37-47页
 1 材料与方法第37-41页
   ·材料第37-38页
   ·转染黏粒片段的制备第38页
   ·转染原代 CEF 细胞第38-39页
   ·病毒的传代第39-40页
   ·重组病毒的鉴定第40-41页
 2 结果第41-45页
   ·五个黏粒片段转染前的酶切鉴定第41-42页
   ·重组病毒的 PCR 鉴定第42-43页
   ·VP2 表达的 Western-blot 检测第43页
   ·VP2 表达的 IFA 检测第43-44页
   ·重组病毒在体外生长特性的测定第44-45页
 3 讨论第45-47页
   ·转染方法的选择第45页
   ·重组病毒 rHVT-VP2 具备优良的遗传稳定性第45-47页
第五章 IBDV 超强毒株攻毒 SPF 鸡免疫保护实验分析第47-53页
 1 材料和方法第47-49页
   ·材料第47页
   ·免疫疫苗及攻读病毒的准备第47-48页
   ·重组病毒 vvIBDV 攻毒免疫保护实验第48页
   ·试验鸡血清抗体水平检测第48-49页
   ·眼观剖检病变观察第49页
 2 结果第49-51页
   ·试验鸡血清抗体的检测第49页
   ·攻毒保护试验第49-51页
 3 讨论第51-53页
全文总结第53-54页
参考文献第54-64页
致谢第64-65页
作者简介第65-66页
导师简介第66-67页

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