| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-21页 |
| 第一节 Paf1复合物的发现 | 第10-11页 |
| 第二节 Paf1复合物与RNA聚合酶Ⅱ | 第11-14页 |
| 第三节 Paf1复合物在组蛋白修饰中的作用 | 第14-17页 |
| 第四节 Paf1复合物参与的RNA3’末端形成 | 第17页 |
| 第五节 Paf1复合物在胚胎干细胞及发育中的作用 | 第17-18页 |
| 第六节 Paf1复合物在癌症发生中的作用 | 第18-19页 |
| 第七节 研究意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-54页 |
| 第一节 实验材料 | 第21-33页 |
| ·实验仪器 | 第21-23页 |
| ·实验试剂 | 第23-26页 |
| ·实验试剂及溶液的配置 | 第26-28页 |
| ·实验耗材 | 第28-29页 |
| ·常用菌株 | 第29页 |
| ·常用载体 | 第29-30页 |
| ·所用引物 | 第30-31页 |
| ·所用质粒 | 第31-33页 |
| 第二节 实验原理与方法 | 第33-54页 |
| ·分子克隆 | 第33-40页 |
| ·蛋白表达 | 第40页 |
| ·蛋白纯化 | 第40-44页 |
| ·蛋白质的表征 | 第44-46页 |
| ·蛋白质之间的相互作用 | 第46-48页 |
| ·晶体的筛选 | 第48-50页 |
| ·细胞相关实验 | 第50-54页 |
| 第三章 Paf1和Leo1之间的相互作用 | 第54-78页 |
| 第一节 Paf1/Leo1全长亚复合物的表达纯化 | 第54-58页 |
| ·Paf1/Leo1全长亚复合物共表达质粒的构建 | 第54页 |
| ·Paf1/Leo1全长亚复合物的表达纯化 | 第54-57页 |
| ·Paf1/Leo1全长亚复合物构象分析 | 第57-58页 |
| 第二节 Paf1和Leo1最小相互作用片段的确定 | 第58-76页 |
| ·确定Paf1和Leo1相互作用的片段 | 第59-69页 |
| ·Paf1~((57-392))/Leo1~((277-562))亚复合物 | 第69-72页 |
| ·探索Paf1/Leo1相互作用的最小片段 | 第72-76页 |
| 第三节 Paf1/Leo1亚复合物的结合比例 | 第76-78页 |
| 第四章 Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))的晶体结构 | 第78-99页 |
| 第一节 Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))的初步筛选及优化 | 第78-83页 |
| ·构建Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))表达载体 | 第78页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))的表达纯化 | 第78-80页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))的构象分析 | 第80-82页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))结晶条件的初步筛选 | 第82页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))结晶条件的优化 | 第82-83页 |
| 第二节 Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))硒代晶体的制备 | 第83-88页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))硒代蛋白的表达纯化 | 第84-87页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))硒代晶体的制备 | 第87-88页 |
| 第三节 Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))的整体结构 | 第88-90页 |
| 第四节 Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))的结构分析 | 第90-99页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))与AdoMet | 第90-93页 |
| ·Paf1~((161-250))/Leo1~((370-462))之间的相互作用 | 第93-99页 |
| 第五章 Paf1复合物的装配机制 | 第99-104页 |
| 第一节 免疫共沉淀所用质粒及构建 | 第99-100页 |
| 第二节 Paf1复合物的装配机制 | 第100-104页 |
| 第六章 Paf1/Leo1异源二聚体特异性识别组蛋白 | 第104-123页 |
| 第一节 Paf1和Leo1亚基特异性识别组蛋白H3 | 第104-110页 |
| ·GST pull-down检测Paf1复合物各个亚基与组蛋白H3的相互作用 | 第104-105页 |
| ·组蛋白H3结合结构域的确定 | 第105-107页 |
| ·Paf1/Leo1异源二聚体对识别组蛋白H3的重要性 | 第107-110页 |
| 第二节 Paf1/Leo1异源二聚体对识别组蛋白八聚体和核小体的重要性 | 第110-123页 |
| ·核小体的体外组装 | 第110-119页 |
| ·Paf1/Leo1异源二聚体与组蛋白八聚体及核小体之间的相互作用 | 第119-123页 |
| 第七章 结果与讨论 | 第123-125页 |
| 第八章 基于蛋白与多肽相互作用的水凝胶 | 第125-130页 |
| 附录 | 第130-134页 |
| 参考文献 | 第134-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 个人简历在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第143页 |
