| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第1章 水貂细小病毒概述 | 第11-22页 |
| ·水貂细小病毒病原学特征 | 第11-12页 |
| ·MEV的形态及理化特性 | 第11页 |
| ·MEV的血凝性 | 第11-12页 |
| ·MEV的抗原性 | 第12页 |
| ·MEV的培养特性 | 第12页 |
| ·水貂细小病毒的分子生物学特性 | 第12-14页 |
| ·MEV基因组特征 | 第12-13页 |
| ·MEV编码的蛋白质 | 第13-14页 |
| ·水貂病毒性肠炎研究进展 | 第14-17页 |
| ·水貂病毒性肠炎的流行病学 | 第14页 |
| ·水貂病毒性肠炎的临床症状及病理变化 | 第14-15页 |
| ·水貂细小病毒的诊断方法 | 第15-17页 |
| ·水貂细小病毒的防治措施 | 第17页 |
| ·单克隆抗体研究进展 | 第17-22页 |
| ·鼠源单克隆抗体 | 第17-18页 |
| ·人源单克隆抗体 | 第18-19页 |
| ·基因工程单克隆抗体 | 第19-22页 |
| 第2章 水貂细小病毒VP2基因片段表达 | 第22-40页 |
| ·试验材料 | 第22-24页 |
| ·毒株、载体、菌种 | 第22页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第22-23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-32页 |
| ·水貂细小病毒DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·目的片段的回收 | 第26页 |
| ·VP2目的片段与PMD18-T载体连接 | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pET32a-Loop1、pET32a-Loop2、pET32a-Loop3的构建 | 第29页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的纯化及鉴定 | 第30-31页 |
| ·间接ELISA检测重组蛋白的抗原性 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-39页 |
| ·PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·重组基因鉴定 | 第33页 |
| ·重组蛋白表达质粒的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的测序结果 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第35-38页 |
| ·重组蛋白过柱纯化 | 第38页 |
| ·间接ELISA对重组蛋白抗原性的鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第3章 MEV VP2基因特异性单克隆抗体制备 | 第40-54页 |
| ·材料和方法 | 第40-45页 |
| ·细胞系和菌株 | 第40页 |
| ·主要试剂和材料 | 第40-41页 |
| ·主要试剂配制 | 第41页 |
| ·病毒的增殖和浓缩 | 第41页 |
| ·动物免疫 | 第41-42页 |
| ·间接ELISA检测方法的优化 | 第42页 |
| ·细胞融合 | 第42-43页 |
| ·制备饲养细胞 | 第42-43页 |
| ·制备脾细胞 | 第43页 |
| ·骨髓瘤细胞SP2/0处理 | 第43-44页 |
| ·脾细胞与骨髓瘤细胞融合 | 第44-45页 |
| ·融合细胞培养 | 第45页 |
| ·阳性孔杂交瘤细胞筛选 | 第45-46页 |
| ·杂交瘤细胞亚克隆化 | 第45-46页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养 | 第46页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第46页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第46页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第46-47页 |
| ·腹水单克隆抗体的纯化浓缩 | 第47页 |
| ·单克隆抗体鉴定 | 第47-48页 |
| ·特异性试验鉴定 | 第47页 |
| ·单克隆抗体效价及浓度测定 | 第47页 |
| ·抗体浓度的测定 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-53页 |
| ·ELISA反应体系优化 | 第48-50页 |
| ·包被原浓度的确定 | 第48页 |
| ·封闭液浓度的确定 | 第48-49页 |
| ·酶标二抗稀释浓度的确定 | 第49-50页 |
| ·融合细胞小鼠选取 | 第50页 |
| ·阳性细胞筛选 | 第50-51页 |
| ·腹水抗体效价测定 | 第51页 |
| ·腹水单克隆抗体特异性检测 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |