| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-39页 |
| ·植物雌配子体的结构、功能和发育 | 第16-22页 |
| ·植物雌配子体的结构 | 第16-17页 |
| ·植物雌配子体的发育过程 | 第17-20页 |
| ·功能大孢子的发生 | 第17-18页 |
| ·雌配子体的发生 | 第18-20页 |
| ·植物雌配子体的功能 | 第20-22页 |
| ·花粉管导向 | 第21页 |
| ·助细胞凋亡 | 第21-22页 |
| ·种子发育的调控 | 第22页 |
| ·植物雌配子体发育过程中的基因表达调控 | 第22-27页 |
| ·参与雌配子体发育的不同生物学过程的基因 | 第22-27页 |
| ·细胞周期调控相关基因参与调节雌配子体发育 | 第23-24页 |
| ·RNA合成、加工等过程相关的基因调节雌配子体的发育 | 第24-25页 |
| ·雌配子体的发育受表观遗传调节 | 第25-26页 |
| ·细胞骨架类基因的突变影响雌配子体的发育 | 第26页 |
| ·信号传导、蛋白激酶类基因参与调节雌配子体与花粉管间的识别 | 第26页 |
| ·转录因子基因调控雌配子体的发育 | 第26-27页 |
| ·雌配子体研究前景 | 第27页 |
| ·解螺旋酶的定义、结构和分类 | 第27-34页 |
| ·解螺旋酶的定义、分类 | 第27页 |
| ·RNA解螺旋酶的结构 | 第27-29页 |
| ·解螺旋酶的生物学功能 | 第29-34页 |
| ·前体mRNA的剪接 | 第29-31页 |
| ·核糖体合成、组装、成熟等生物过程 | 第31-32页 |
| ·RNA转运 | 第32-33页 |
| ·转录机制 | 第33页 |
| ·翻译起始 | 第33页 |
| ·细胞器的基因表达 | 第33-34页 |
| ·RNA的降解 | 第34页 |
| ·解螺旋酶的研究前景 | 第34页 |
| ·真核生物mRNA前体的剪接 | 第34-37页 |
| ·U5 snRNP在剪接体中的作用 | 第36-37页 |
| ·本研究的目的及其意义 | 第37-39页 |
| 2 实验材料与实验方法 | 第39-65页 |
| ·实验材料 | 第39-45页 |
| ·植物材料及其生长条件 | 第39页 |
| ·菌株和质粒 | 第39页 |
| ·各种生化试剂、培养基、酶 | 第39-43页 |
| ·各种酶 | 第39-40页 |
| ·各种生化试剂 | 第40页 |
| ·各种缓冲液及培养基配方 | 第40-43页 |
| ·实验中所有引物名称及其序列 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-65页 |
| ·构建植物转基因表达载体的一般步骤 | 第45-49页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第45-46页 |
| ·PCR引物设计 | 第46页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第46页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化(热激法) | 第47页 |
| ·大肠杆菌的菌落PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第48页 |
| ·质粒DNA的酶切验证 | 第48-49页 |
| ·DNA片段的回收(试剂盒法) | 第49页 |
| ·目的DNA片段与质粒DNA片段的连接 | 第49页 |
| ·根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第49-50页 |
| ·根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·电转法转化农杆菌 | 第49-50页 |
| ·拟南芥的栽培与转化 | 第50页 |
| ·拟南芥的栽培 | 第50页 |
| ·拟南芥的转化 | 第50页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第51页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第51页 |
| ·Quantitative Real-Time PCR分析 | 第51页 |
| ·AtDEAHb3的亚细胞定位 | 第51-52页 |
| ·亚细胞定位载体的构建 | 第51-52页 |
| ·烟草叶片注射 | 第52页 |
| ·RNA原位杂交 | 第52-56页 |
| ·正义和反义探针的制备 | 第52-54页 |
| ·材料的固定、脱水及包埋 | 第54页 |
| ·切片 | 第54-55页 |
| ·脱蜡、消化、乙酰化、杂交 | 第55-56页 |
| ·洗片 | 第56页 |
| ·杂交信号检测 | 第56页 |
| ·酵母遗传互补实验 | 第56-58页 |
| ·酵母遗传互补载体的构建 | 第56-57页 |
| ·酵母转化 | 第57-58页 |
| ·酵母双杂交 | 第58页 |
| ·酵母双杂交的原理 | 第58页 |
| ·酵母双杂交载体 | 第58页 |
| ·酵母双杂交 | 第58页 |
| ·BiFC实验 | 第58-59页 |
| ·Pull-Down实验 | 第59-63页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第60页 |
| ·聚丙烯凝胶电泳 | 第60-61页 |
| ·原核表达蛋白的纯化 | 第61-62页 |
| ·Pull-Down实验 | 第62-63页 |
| ·Western-Blot实验 | 第63页 |
| ·GUS染色分析 | 第63页 |
| ·拟南芥胚珠透明 | 第63-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-89页 |
| ·拟南芥DEAH-box解螺旋酶家族 | 第65-67页 |
| ·拟南芥DEAH-box解螺旋酶蛋白序列的获得与分析 | 第65-66页 |
| ·DEAH-box解旋酶蛋白序列的获得 | 第65页 |
| ·DEAH-box解螺旋酶的聚类分析 | 第65-66页 |
| ·解旋酶DEAH-box家族与DEAD-box家族的比较 | 第66页 |
| ·拟南芥DEAH-box解旋酶家族的相关研究 | 第66-67页 |
| ·拟南芥解螺旋酶AtDEAHb3的功能研究 | 第67-89页 |
| ·atdeahb3突变体的表型分析 | 第67-75页 |
| ·分离atdeahb3突变体 | 第68页 |
| ·AtDEAHb3的杂合突变体自交后代中没有纯合体 | 第68页 |
| ·AtDEAHb3杂合突变体角果中部分种子败育 | 第68-69页 |
| ·AtDEAHb3杂合突变体的花粉活力、花粉萌发、花粉管生长与野生型类似 | 第69-70页 |
| ·atdeahb3突变的雌配子体不育 | 第70页 |
| ·AtDEAHb3杂合突变体中部分雌配子体发育延迟 | 第70-73页 |
| ·AtDEAHb3杂合突变体中雌配子体发育的同步性被破坏 | 第73-75页 |
| ·部分atdeahb3突变的雌配子体能够发育成熟 | 第75页 |
| ·AtDEAHb3及其编码蛋白的结构 | 第75-78页 |
| ·AtDEAHb3能够互补酵母Prp22p突变株的热敏感表型 | 第78页 |
| ·AtDEAHb3的表达分析 | 第78-81页 |
| ·qRT-PCR实验 | 第78-79页 |
| ·AtDEAHb3的组织表达分析 | 第79-80页 |
| ·原位杂交检测AtDEAHb3在雌配子体发育过程中的表达 | 第80-81页 |
| ·AtDEAHb3蛋白的亚细胞定位 | 第81-82页 |
| ·AtDEAHh3与GFA1表达模式相似 | 第82-87页 |
| ·酵母双杂交实验证明AtDEAHb3与GFA1的互作 | 第83-84页 |
| ·BiFC实验证明AtDEAHb3与GFA1的互作 | 第84-85页 |
| ·Pull-Down实验验证AtDEAHb3能够与GFA1互作 | 第85-86页 |
| ·AtDEAHb3通过HELICc domain与GFA1互作 | 第86-87页 |
| ·AtDEAHb3-amiRNAi转基因拟南芥幼苗生长缓慢 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-93页 |
| 5 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第105页 |
