| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 图目录 | 第10-12页 |
| 表目录 | 第12-13页 |
| 主要符号表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-29页 |
| ·细菌氮代谢调控系统 | 第14-16页 |
| ·氮同化途径 | 第14-15页 |
| ·一般氮代谢调控机制 | 第15-16页 |
| ·NtrC 蛋白的结构与功能分析 | 第16-17页 |
| ·NtrC 在代谢调控中的功能 | 第17-21页 |
| ·NtrC 调节氮源的利用 | 第17-18页 |
| ·NtrC 在固氮细菌中的调控 | 第18-19页 |
| ·NtrC 参与多种胞外聚合物合成的调控 | 第19-20页 |
| ·NtrC 在碳氮偶联调控中的作用 | 第20-21页 |
| ·NtrC 的全局调控机制 | 第21-24页 |
| ·基因芯片分析大肠杆菌中受 NtrC 调控的基因 | 第22页 |
| ·恶臭假单胞菌 ntrC 突变株的转录组研究 | 第22-23页 |
| ·沼泽红假单胞菌 ntrBC 突变株的转录组分析 | 第23-24页 |
| ·NtrC 表达与调控 | 第24-29页 |
| ·NtrC 对靶基因的转录调控 | 第24-27页 |
| ·NtrC 自身的表达调控 | 第27-29页 |
| 2 引言 | 第29-32页 |
| ·研究的目的及意义 | 第29-30页 |
| ·主要研究内容 | 第30-31页 |
| ·ntrC 基因的缺失突变株和功能互补株的构建 | 第30页 |
| ·ntrC 突变株功能鉴定 | 第30页 |
| ·表型相关基因表达差异的研究 | 第30页 |
| ·NtrC 调控机制的初步研究 | 第30-31页 |
| ·技术路线 | 第31-32页 |
| 3 材料与方法 | 第32-55页 |
| ·实验材料与仪器 | 第32-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·培养基和接种液 | 第32-34页 |
| ·酶类和生化试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| ·常用溶液 | 第35-38页 |
| ·方法 | 第38-55页 |
| ·细菌基因组 DNA 的提取 | 第38页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第38页 |
| ·PCR 反应 | 第38-43页 |
| ·高保真 Taq 酶扩增产物末端加 A 方法 | 第43页 |
| ·DNA 片段的回收与纯化 | 第43页 |
| ·酶切及连接反应 | 第43-44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44-45页 |
| ·三亲结合实验 | 第45页 |
| ·生长曲线的测定 | 第45-46页 |
| ·PMs 分析野生型与突变株对氮源的利用情况 | 第46页 |
| ·固氮酶活的测定 | 第46-47页 |
| ·全细胞蛋白含量的测定 | 第47-48页 |
| ·反硝化能力的测定 | 第48页 |
| ·趋化实验 | 第48页 |
| ·Biolog 分析野生型与突变株的碳源代谢谱 | 第48-49页 |
| ·氧胁迫耐受实验 | 第49页 |
| ·RNA 的提取 | 第49-50页 |
| ·cDNA 链的合成 | 第50页 |
| ·实时荧光定量 PCR 反应 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第52页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第52-53页 |
| ·Western Blot 杂交检测 | 第53-55页 |
| 4 结果与分析 | 第55-81页 |
| ·施氏假单胞菌 A1501 NtrC 与其它菌中同源蛋白的进化分析 | 第55-56页 |
| ·ntrC 缺失突变株的构建 | 第56-60页 |
| ·缺失突变株的构建原理 | 第56-57页 |
| ·ntrC 基因重组载体的构建 | 第57-58页 |
| ·ntrC 缺失突变株的筛选与验证 | 第58页 |
| ·ntrC 功能互补菌株的构建 | 第58-60页 |
| ·ntrC 突变株表型鉴定 | 第60-73页 |
| ·ntrC 基因突变对 A1501 生长的影响 | 第60-61页 |
| ·PMs 分析 ntrC 基因突变后对氮源的利用情况 | 第61-62页 |
| ·不同氮源培养条件下细菌总 RNA 的提取 | 第62-63页 |
| ·硝酸盐和尿素利用相关基因表达的表达 | 第63-64页 |
| ·ntrC 突变对固氮酶活性的影响 | 第64-65页 |
| ·固氮条件下细菌总 RNA 的提取 | 第65页 |
| ·氮代谢相关基因表达差异分析 | 第65-66页 |
| ·反硝化能力的测定 | 第66-67页 |
| ·NtrC 与 CbrB 在固氮酶活上的偶联调节 | 第67-69页 |
| ·ntrC 突变对细胞趋化能力的影响 | 第69-70页 |
| ·野生型与突变株的底物代谢谱测定 | 第70-71页 |
| ·ntrC 基因缺失增强氧胁迫耐受性 | 第71-72页 |
| ·氧胁迫条件下抗氧胁迫相关基因的表达 | 第72-73页 |
| ·NtrC 蛋白的表达和纯化 | 第73-78页 |
| ·NtrC 蛋白表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·NtrC 蛋白的融合表达 | 第75页 |
| ·NtrC 蛋白的纯化 | 第75-76页 |
| ·质谱分析 | 第76-77页 |
| ·Western Blot 检测 NtrC 的表达 | 第77-78页 |
| ·NtrC 靶标基因结合位点的分析 | 第78-80页 |
| ·预测 A1501 中 NtrC 介导的固氮调控机制 | 第80-81页 |
| 5 结论与讨论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 作者简介 | 第93页 |
