| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1. 石斛属植物概述 | 第13-15页 |
| ·石斛种类及生态分布 | 第13页 |
| ·石斛属植物的药用价值 | 第13-14页 |
| ·石斛研究现状及展望 | 第14-15页 |
| 2 WRKY转录因子及其在植物防御反应中的功能研究概况 | 第15-23页 |
| ·植物存在天然的免疫系统 | 第15-17页 |
| ·WRKY转录因子的结构特点 | 第17-18页 |
| ·WRKY转录因子参与植物的防御反应 | 第18-20页 |
| ·WRKY转录因子保守的结构序列及其作用 | 第20页 |
| ·WRKY网络存在的证据 | 第20-22页 |
| ·WRKY因子信号转导网络的级联反应 | 第22页 |
| ·WRKY转录因子的功能多样性 | 第22-23页 |
| 3 RACE技术简介 | 第23-24页 |
| 4 本研究的内容和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 DnWRKY29基因的克隆及生物信息学分析 | 第26-43页 |
| 1 材料与方法 | 第26-36页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌种与质粒 | 第26页 |
| ·培养基与生化试剂 | 第26页 |
| ·实验所用软件及程序 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-36页 |
| ·Trizol法提取石斛根部总RNA | 第26-27页 |
| ·RNA去磷酸化 | 第27页 |
| ·RNA沉淀 | 第27-28页 |
| ·去mRNA帽子结构 | 第28页 |
| ·去帽子mRNA与RNA Oligo连接 | 第28-29页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第29-30页 |
| ·内参检测 | 第30页 |
| ·DnWRKY29基因中间片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·目的片段的纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR产物与pEASY-T1载体的连接 | 第32页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌(重组质粒的转化) | 第32页 |
| ·重组体的鉴定 | 第32-33页 |
| ·5'RACE获得5'端序列 | 第33-34页 |
| ·3'RACE获得3'端序列 | 第34-35页 |
| ·cDNA全长序列的获得 | 第35-36页 |
| ·DnWRKY29全长cDNA的生物信息学分析 | 第36页 |
| 2 结果分析 | 第36-43页 |
| ·RNA的质量及反转录 | 第36-37页 |
| ·cDNA中间片段的分离 | 第37页 |
| ·RACE 5'片段的分离 | 第37-38页 |
| ·RACE 3'片段的分离 | 第38页 |
| ·全长cDNA的获得 | 第38-39页 |
| ·DnWRKY29的全长cDNA序列分析及生物信息学分析 | 第39-43页 |
| ·DnWRKY29的全长cDNA序列及预测氨基酸序列 | 第39-40页 |
| ·CDD分析 | 第40-41页 |
| ·同源性分析 | 第41-42页 |
| ·限制性酶切位点分析 | 第42-43页 |
| 第三章 DnWRKY29转基因烟草植株的获得 | 第43-55页 |
| 1 材料与方法 | 第43-48页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·菌种与质粒 | 第43页 |
| ·培养基与生化试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-48页 |
| ·引物设计与合成 | 第43-44页 |
| ·载体SN1301的克隆 | 第44页 |
| ·带有酶切位点的目的片段的克隆 | 第44页 |
| ·的片段与T载体相连并转化大肠杆菌 | 第44页 |
| ·阳性重组子的鉴定和测序 | 第44页 |
| ·重组质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·载体SN1301和含目的片断的克隆载体的双酶切 | 第45页 |
| ·表达载体与目的片段的连接并转化大肠杆菌 | 第45-46页 |
| ·植物表达载体的鉴定 | 第46-47页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第47页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌并检测 | 第47页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第47页 |
| ·农杆菌侵染液的制备 | 第47-48页 |
| ·农杆菌侵染烟草叶片 | 第48页 |
| ·筛选培养 | 第48页 |
| ·生根培养 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-55页 |
| ·含酶切位点的DnWRKY29基因的获得 | 第48-49页 |
| ·DnWRKY29连接T载体克隆并进行PCR检测 | 第49页 |
| ·测序 | 第49页 |
| ·SN1301载体和重组子质粒提取 | 第49-50页 |
| ·酶切检测 | 第50-51页 |
| ·连接转化 | 第51页 |
| ·植物表达载体鉴定 | 第51-52页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌并检测 | 第52-53页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草苗(T0代)的获得 | 第54-55页 |
| 第四章 转基因烟草的鉴定及DnWRKY29基因功能分析 | 第55-70页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·引物 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-58页 |
| ·CTAB方法提取烟草叶片DNA | 第55页 |
| ·转基因烟草植株GUS基因的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·烟草种子的胁迫处理 | 第56-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-70页 |
| ·转基因烟草苗GUS基因的检测 | 第59页 |
| ·T1代烟草对非生物胁迫的抗性鉴定 | 第59-70页 |
| ·甘露醇胁迫对转基因烟草种子发芽率的影响 | 第59-62页 |
| ·NaCl胁迫对转基因烟草种子发芽率的影响 | 第62-64页 |
| ·非生物胁迫对转基因烟草幼苗根长和鲜重的影响 | 第64-67页 |
| ·Mannitol胁迫下SOD、POD、CAT酶活力及MDA含量测定 | 第67-70页 |
| 第五章 总结和展望 | 第70-72页 |
| 1 总结 | 第70-71页 |
| 2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录 | 第79-86页 |
| 作者简介 | 第86页 |
