| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| ·共生固氮的研究背景与意义 | 第9-17页 |
| ·根瘤菌生理特性、分类 | 第9-10页 |
| ·豆科植物根瘤形成的过程 | 第10-11页 |
| ·共生信号转导在根瘤菌中的分子机制 | 第11-12页 |
| ·豆科植物中早期共生信号转导的分子机制 | 第12-16页 |
| ·钙离子信号 | 第16-17页 |
| ·离子通道蛋白 | 第17-18页 |
| ·离子通道的分类和功能 | 第17页 |
| ·钙离子通道 | 第17-18页 |
| ·翻译延伸因子EF1A | 第18-19页 |
| ·翻译延伸因子1A(EF1A)基因的结构和功能 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交系统简介 | 第19页 |
| ·研究的意义和目的 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-32页 |
| ·材料 | 第20-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·营养液和培养基配方 | 第21-22页 |
| ·缓冲液和反应试剂 | 第22-23页 |
| ·蛋白质纯化试剂 | 第23页 |
| ·Western Blotting试剂 | 第23页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-32页 |
| ·RNA的抽提 | 第24页 |
| ·RT-PCR合成cDNA第一链 | 第24-25页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第25页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·菌落PCR | 第26页 |
| ·酵母双杂交筛选 | 第26-29页 |
| ·检测DNA-BD融合蛋白的转录活性 | 第26-27页 |
| ·诱饵菌株的毒性测试 | 第27页 |
| ·诱饵菌株和文库菌株杂交 | 第27-28页 |
| ·酵母质粒的抽提 | 第28-29页 |
| ·POLLUX-RCK-pGADT7重组子的构建 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞(电转)的制备以及转化 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第30页 |
| ·蛋白质表达纯化 | 第30-31页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第31页 |
| ·Western Blotting验证相互作用 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-38页 |
| ·百脉根Pollux-RCK cDNA片段的克隆及序列分析 | 第32-33页 |
| ·Pollux-RCK酵母双杂交诱饵质粒的构建 | 第33页 |
| ·百脉根cDNA文库的筛选 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆的PCR及酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆DNA序列分析及功能预测 | 第35页 |
| ·酵母双杂验证POLLUX-RCK与EF1A蛋白相互作用 | 第35-36页 |
| ·EF1A与共生信号转导基因相互作用 | 第36页 |
| ·Pollux-C融合蛋白及EF1A融合蛋白的表达和纯化 | 第36-37页 |
| ·体外Pollux-RCK与EF1A蛋白相互作用的鉴定 | 第37-38页 |
| 4 总结与讨论 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
