| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-51页 |
| 第一章 布鲁氏菌及其免疫逃避机制的研究概况 | 第13-23页 |
| ·布鲁氏菌的概述 | 第13页 |
| ·布鲁氏菌的致病性 | 第13-14页 |
| ·布鲁氏菌对动物的致病性 | 第13-14页 |
| ·布鲁氏菌对人的致病性 | 第14页 |
| ·布鲁氏菌的病原特征 | 第14-15页 |
| ·布鲁氏菌的基因组 | 第15页 |
| ·布鲁氏菌在细胞内的复制 | 第15-16页 |
| ·布鲁氏菌的复制部位 | 第15页 |
| ·布鲁氏菌在细胞内的复制对宿主具有保护作用 | 第15-16页 |
| ·布鲁氏菌的的抗原与毒力因子 | 第16-20页 |
| ·布鲁氏菌的抗原 | 第16-18页 |
| ·布鲁氏菌的毒力相关因子 | 第18-20页 |
| ·布鲁氏菌病的发病机制 | 第20-21页 |
| ·布鲁氏菌感染对巨噬细胞的影响 | 第21页 |
| ·Omp25 蛋白在布鲁氏菌免疫逃逸中的作用 | 第21-22页 |
| ·布鲁氏菌的治疗与疫苗 | 第22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 布鲁氏菌 Omp25 蛋白的真原核表达、纯化及鉴定 | 第23-38页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌株、细胞和质粒 | 第23页 |
| ·血清与抗体 | 第23页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第23页 |
| ·主要的仪器设备 | 第23-24页 |
| ·培养基的配制 | 第24页 |
| ·溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·布鲁氏菌基因组 DNA 的提取 | 第25页 |
| ·PCR 引物合成 | 第25-26页 |
| ·omp25 基因的扩增 | 第26页 |
| ·PCR 产物电泳检测及回收 | 第26页 |
| ·克隆载体的构建 | 第26-28页 |
| ·重组表达质粒 pCI-neo-omp25 的构建 | 第28-29页 |
| ·重组真核质粒 pCI-neo-omp25 在猪肺泡巨噬细胞 3D4/21 中的表达 | 第29页 |
| ·重组原核质粒 pET-32a-omp25 的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·BCA 法测定蛋白质浓度 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE 检测 Omp25 蛋白 | 第30-31页 |
| ·Western blot 鉴定 Omp25 蛋白 | 第31-32页 |
| ·结果及分析 | 第32-36页 |
| ·布鲁氏菌 omp25 基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·重组克隆质粒 pGEM-T-omp25 的构建和鉴定 | 第33页 |
| ·基因测序分析 | 第33-34页 |
| ·布鲁氏菌 Omp25 蛋白的原核表达 | 第34-36页 |
| ·布鲁氏菌 Omp25 蛋白的真核表达 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 Omp25 蛋白对巨噬细胞分泌 TNF-α的影响及分子机制研究 | 第38-51页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·试验器材 | 第38页 |
| ·质粒 | 第38页 |
| ·溶液的配制 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-42页 |
| ·猪 TNF-α启动子荧光素酶报告基因系列载体的构建 | 第39-40页 |
| ·猪巨噬细胞 3D4/21 形态观察 | 第40页 |
| ·MTT 检测 Omp25 表达对 3D4/21 细胞生长活性的影响 | 第40页 |
| ·ELISA 检测 Omp25 蛋白对巨噬细胞细胞因子产生的影响 | 第40-41页 |
| ·Real-time qPCR 检测 | 第41-42页 |
| ·TNF-α启动子活性及 NF-κB 转录活性的检测 | 第42页 |
| ·统计学分析 | 第42页 |
| ·结果及分析 | 第42-49页 |
| ·Omp25 蛋白对 3D4/21 细胞形态影响 | 第42-43页 |
| ·MTT 检测 Omp25 蛋白对 3D4/21 细胞生长活性影响 | 第43页 |
| ·ELISA 检测 Omp25 蛋白对 3D4/21 细胞分泌细胞因子 TNF-α的影响 | 第43-44页 |
| ·Omp25 蛋白对巨噬细胞中 TNF-α mRNA 的影响 | 第44-46页 |
| ·猪 TNF-α启动子序列分析 | 第46-47页 |
| ·猪 TNF-α启动子荧光素酶报告质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·Omp25 蛋白对巨噬细胞 TNF-α启动子的影响 | 第48-49页 |
| ·Omp25 蛋白对 NF-κB 转录活性的影响 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 英文缩略词及中英文对照表 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
