| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-25页 |
| ·兰科植物及其菌根研究概述 | 第11-16页 |
| ·兰科植物概况 | 第11页 |
| ·兰科菌根特点概述 | 第11-12页 |
| ·兰科植物菌根真菌研究现状 | 第12-13页 |
| ·国外兰科菌根真菌研究 | 第12-13页 |
| ·国内兰科菌根真菌研究 | 第13页 |
| ·兰科植物与菌根真菌互作研究现状 | 第13-14页 |
| ·兰科菌根真菌——胶膜菌属(Tulasnella)的形态特征及分类地位 | 第14-16页 |
| ·丝状真菌遗传转化体系概述 | 第16-21页 |
| ·丝状真菌遗传转化研究现状 | 第16-17页 |
| ·丝状真菌遗传转化方法 | 第17-19页 |
| ·CaCl_2-PEG介导的原生质体转化 | 第17页 |
| ·限制性内切酶介导的真菌遗传转化(Restriction Enzyme-Mediated Integration,REMI) | 第17-18页 |
| ·电激转化法 | 第18页 |
| ·基因枪转化(Biolistics) | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导的真菌遗传转化(Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation,ATMT) | 第19页 |
| ·丝状真菌原生质体技术研究现状 | 第19-21页 |
| ·遗传转化在兰科菌根菌中的应用前景 | 第21-23页 |
| ·遗传转化在兰科菌根菌中应用的基础 | 第21-22页 |
| ·菌根真菌释放的信号分子 | 第21-22页 |
| ·菌根真菌在信号传导过程中的基因表达 | 第22页 |
| ·遗传转化在兰科菌根菌中研究及应用的必要性 | 第22-23页 |
| ·研究意义和技术路线 | 第23-25页 |
| ·研究意义 | 第23页 |
| ·技术路线 | 第23-25页 |
| 2 试验材料与方法 | 第25-35页 |
| ·试验材料 | 第25-28页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第25-26页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第26-28页 |
| ·真菌培养基 | 第26页 |
| ·细菌培养基 | 第26页 |
| ·原生质体再生培养基 | 第26-27页 |
| ·原生质体制备试剂 | 第27页 |
| ·质粒提取试剂 | 第27页 |
| ·基因组DNA提取试剂 | 第27页 |
| ·CaCl_2-PEG转化试剂 | 第27-28页 |
| ·试验方法 | 第28-35页 |
| ·原生质体制备 | 第28-30页 |
| ·菌丝培养和收集 | 第28页 |
| ·原生质体的制备 | 第28-30页 |
| ·原生质体再生 | 第30-31页 |
| ·冉生菌株分子鉴定 | 第31-33页 |
| ·SDS-CTAB法提取真菌总DNA | 第31-32页 |
| ·PCR引物与反应体系 | 第32-33页 |
| ·PEG介导的遗传转化 | 第33-35页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第33页 |
| ·CaCl_2/PEG介导的原生质体遗传转化 | 第33-34页 |
| ·抗生素筛选转化子 | 第34-35页 |
| 3 试验结果与分析 | 第35-47页 |
| ·原生质体的制备 | 第35-42页 |
| ·菌丝生长速率及其对原生质体产量的影响 | 第35页 |
| ·菌龄对原生质体产量的影响 | 第35-36页 |
| ·六种稳渗剂的原生质体产量对比 | 第36-38页 |
| ·稳渗剂种类、酶液浓度、酶解温度对原生质体产量影响的正交试验 | 第38-40页 |
| ·菌丝和原生质体细胞核染色结果 | 第40-42页 |
| ·菌丝DAPI染色结果 | 第40-41页 |
| ·两种离心方法收集原生质体,细胞核染色结果对比 | 第41-42页 |
| ·原生质体的再生 | 第42-44页 |
| ·离心方法对原生质体再生的影响 | 第42页 |
| ·再生培养基原生质体再生的影响 | 第42-44页 |
| ·再生菌株分子鉴定结果 | 第44页 |
| ·CaCl_2/PEG介导的原生质体遗传转化初步试验 | 第44-47页 |
| ·美孢胶膜菌Ge-18对潮霉素的敏感性 | 第44页 |
| ·PEG对美孢胶膜菌Ge-18再生的影响 | 第44-45页 |
| ·转化子筛选 | 第45-47页 |
| ·两种转化子筛选方法对比 | 第45页 |
| ·转化子筛选结果 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| ·影响胶膜菌属真菌原生质体产量的因素 | 第47-48页 |
| ·供试菌株的选择 | 第47-48页 |
| ·菌丝生长速率对原生质体产量的影响 | 第47页 |
| ·菌丝致密度对原生质体产量的影响 | 第47-48页 |
| ·酶解条件对原生质体产量的影响 | 第48页 |
| ·稳渗剂对原生质体产量的影响 | 第48页 |
| ·酶解时间对原生质体产量的影响 | 第48页 |
| ·原生质体的收集与再生 | 第48-49页 |
| ·两种离心方法对比 | 第48-49页 |
| ·再生培养基的选择 | 第49页 |
| ·CaCl_2-PEG介导的原生质体转化 | 第49-51页 |
| ·兰科植物与菌根真菌分子共生机制研究方法 | 第49-50页 |
| ·影响CaCl_2-PEG转化的因素 | 第50-51页 |
| 5 结论与展望 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第51页 |
| ·展望 | 第51-53页 |
| 6 附录 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 个人简介 | 第64-65页 |
| 导师简介 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
