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南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L光保护机制研究

摘要第1-6页
Abstract第6-9页
目录第9-12页
第一章 前言第12-23页
   ·光合作用的光抑制第12-13页
   ·光保护机制第13-18页
     ·光保护机制研究现状第13-15页
     ·光保护基因 LhcSR第15-16页
     ·叶黄素循环第16-18页
   ·南极冰藻第18-21页
     ·南极冰藻概况第18-19页
     ·南极衣藻 Chlamydomonas sp. ICE-L第19-21页
   ·拟采用的研究技术路线第21页
   ·本论文研究目的和意义第21-23页
第二章 叶绿素荧光参数测定第23-30页
   ·材料与方法第23-24页
     ·藻种和培养方法第23页
     ·试验仪器第23-24页
   ·试验方法第24-25页
     ·光响应曲线测定第24页
     ·处理条件第24-25页
     ·叶绿素荧光参数的测定第25页
     ·数据统计分析第25页
   ·结果与分析第25-28页
     ·光响应曲线第25-26页
     ·不同光强对 PSII 光化学效率的影响第26-27页
     ·高盐胁迫对 PSII 光化学效率的影响第27页
     ·UV-B 对 PSII 光化学效率的影响第27-28页
   ·讨论与总结第28-30页
第三章 LhcSR1 和 LhcSR 2 基因 cDNA 克隆与生物信息学分析第30-45页
   ·材料与方法第30-32页
     ·藻种第30页
     ·试剂及试剂盒第30-31页
     ·仪器及软件第31页
     ·引物设计及合成第31-32页
   ·试验方法第32-38页
     ·南极衣藻总 RNA 提取与鉴定第32-33页
     ·cDNA 第一链的合成第33页
     ·cDNA 特异片段的 PCR 扩增第33-34页
     ·目的片段的回收第34-35页
     ·目的片段与载体的连接第35页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第35-36页
     ·挑取单菌落进行阳性检测第36页
     ·cDNA 的 3’-和 5’-端的 RACE-PCR 扩增第36-38页
     ·生物信息学分析第38页
   ·结果与分析第38-43页
     ·南极衣藻总 RNA 的提取鉴定第38-39页
     ·LhcSR1 和 LhcSR 2 特异片段的测序结果与序列的同源性分析第39-40页
     ·cDNA 3’-和 5’-端的 RACE-PCR 扩增与鉴定第40-41页
     ·LhcSR1/2 cDNA 和氨基酸序列分析第41-42页
     ·LHCSR1 和 LHCSR 2 系统进化树分析第42-43页
   ·讨论与总结第43-45页
第四章 南极衣藻 LhcSR1 和 LhcSR2 表达调控第45-57页
   ·材料与方法第45-47页
     ·藻种第45页
     ·试剂及仪器第45页
     ·定量引物设计第45-46页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳相关试剂第46页
     ·Western blot 相关试剂第46-47页
     ·数据处理第47页
   ·试验方法第47-50页
     ·胁迫诱导第47-48页
     ·南极衣藻总 RNA 提取及 cDNA 合成第48页
     ·实时荧光定量 PCR 反应体系第48-49页
     ·SDS-PAGE 电泳第49页
     ·Western blot 检测蛋白表达第49-50页
   ·结果与分析第50-54页
     ·实时荧光定量 PCR 结果第50-51页
     ·不同光强对 LhcSR1 和 LhcSR2 基因的转录调控第51-52页
     ·高盐对 LhcSR1 和 LhcSR2 基因的转录调控第52-53页
     ·紫外对 LhcSR1 和 LhcSR2 基因的转录调控第53-54页
     ·蛋白表达第54页
   ·讨论与总结第54-57页
第五章 南极衣藻 LHCSR1 和 LHCSR2 蛋白原核表达第57-68页
   ·材料与方法第57-58页
     ·菌株与质粒第57页
     ·质粒构建相关试剂第57页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳相关试剂第57-58页
   ·试验方法第58-62页
     ·引物设计与目的片段的扩增第58-59页
     ·表达载体 PET-28a-LHCSR 的构建第59-61页
     ·表达菌株的诱导表达第61-62页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第62页
     ·融合蛋白的表达分析第62页
   ·结果与分析第62-66页
     ·LhcSR1 和 LhcSR2 基因 ORF 的扩增第62-63页
     ·质粒提取结果第63-64页
     ·菌落 PCR 筛选阳性克隆第64-65页
     ·融合蛋白的诱导表达第65-66页
   ·讨论与总结第66-68页
第六章 叶黄素循环在南极衣藻光保护机制中的作用第68-75页
     ·材料与方法第68页
     ·仪器及试剂第68页
     ·试验方法第68-70页
     ·标准曲线的制作第68-69页
     ·样品处理条件第69页
     ·色素提取第69页
     ·色谱条件第69-70页
     ·结果与分析第70-73页
     ·标准曲线的确定第70-71页
     ·南极衣藻中叶黄素循环组分的鉴定第71页
     ·叶黄素循环的脱环氧化状态变化特征第71-73页
     ·讨论与总结第73-75页
第七章 总结及后续工作计划第75-78页
   ·总结第75-76页
   ·后续工作计划第76-78页
参考文献第78-87页
附录第87-88页
硕士期间发表及完成文章第88-91页
致谢第91页

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