| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 符号说明 | 第21-22页 |
| 第一章 前言 | 第22-33页 |
| 1 内皮抑素 | 第22-27页 |
| ·内皮抑素的起源与发展 | 第22-23页 |
| ·内皮抑素的表达 | 第23-24页 |
| ·内皮抑素的应用 | 第24-25页 |
| ·内皮抑素存在的问题及改进方法 | 第25-27页 |
| 2 Tat蛋白转导域(Tat prtotein transduction domain,Tat PTD) | 第27-31页 |
| ·Tat PTD起源与结构 | 第27-28页 |
| ·Tat PTD的入胞机制 | 第28-30页 |
| ·Tat PTD的应用 | 第30-31页 |
| 3 本课题的设计思路及拟解决的问题 | 第31-33页 |
| 第二章 Tat PTD-endostatin的制备 | 第33-74页 |
| 第一节 Tat PTD-endostatin在毕赤酵母中的表达纯化 | 第33-55页 |
| 1 材料 | 第33-36页 |
| ·菌株及质粒 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·常用溶液配制方法 | 第34-35页 |
| ·试剂与材料 | 第35-36页 |
| ·实验中所用的仪器设备 | 第36页 |
| 2 实验方法 | 第36-47页 |
| ·毕赤酵母表达载体pGAPZαA-Tat PTD-endostatin(pG/TE)的构建 | 第36-37页 |
| ·目的基因的构建 | 第37-38页 |
| ·目的基因的克隆 | 第38-41页 |
| ·表达Tat PTD-Es的毕赤酵母工程菌株的构建 | 第41-45页 |
| ·重组Tat PTD-Es蛋白的表达与鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组Tat PTD-Es的分离纯化 | 第46-47页 |
| 3 实验结果 | 第47-53页 |
| ·目的基因的获得 | 第47-48页 |
| ·表达载体的构建与验证 | 第48-49页 |
| ·表达Tat PTD-Es毕赤酵母工程菌株的构建及验证 | 第49-51页 |
| ·重组Tat PTD-endostatin蛋白的表达与鉴定 | 第51页 |
| ·重组Tat PTD-Es蛋白的分离纯化 | 第51-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-55页 |
| 第二节 Tat PTD-endostatin在大肠杆菌中的表达、复性及纯化 | 第55-74页 |
| 1 材料 | 第55-58页 |
| ·菌株及质粒 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55-56页 |
| ·常用溶液配制方法 | 第56-57页 |
| ·试剂与材料 | 第57页 |
| ·实验中所用的仪器设备 | 第57-58页 |
| 2 实验方法 | 第58-66页 |
| ·大肠杆菌表达质粒pET28a/Tat PTD-endostatin(pET28a/TE)的构建 | 第58-59页 |
| ·目的基因的构建 | 第59-60页 |
| ·目的基因的克隆 | 第60-62页 |
| ·表达Tat PTD-Es的大肠杆菌菌株构建 | 第62页 |
| ·Tat PTD-Es在大肠杆菌中的诱导表达 | 第62-63页 |
| ·Tat PTD-Es包涵体复性及纯化 | 第63-65页 |
| ·纯化样品Tat PTD-Es的鉴定 | 第65-66页 |
| 3 实验结果 | 第66-71页 |
| ·大肠杆菌表达质粒pET28a/TE的测序 | 第66页 |
| ·阳性Rossetta菌株的鉴定 | 第66-69页 |
| ·包涵体洗涤条件的摸索 | 第69页 |
| ·蛋白浓度标准曲线 | 第69-70页 |
| ·纯化后样品的鉴定 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 第三章 Tat PTD-Es的体外活性及入胞机制研究 | 第74-93页 |
| 1 实验材料 | 第74-76页 |
| ·细胞株及种蛋 | 第74页 |
| ·常用溶液配制方法 | 第74-75页 |
| ·试剂与材料 | 第75页 |
| ·实验中所用的仪器设备 | 第75-76页 |
| 2 实验方法 | 第76-80页 |
| ·Tat PTD-Es及Es对内皮细胞的作用 | 第76页 |
| ·Tat PTD-Es及Es对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的作用 | 第76-78页 |
| ·Tat PTD-Es的入胞机制考察 | 第78-80页 |
| 3 实验结果 | 第80-90页 |
| ·Tat PTD-Es及Es对内皮细胞的作用 | 第80-81页 |
| ·Tat PTD-Es及Es对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的作用 | 第81-83页 |
| ·Tat PTD-Es与Es入胞能力的比较 | 第83-85页 |
| ·Tat PTD-Es的入胞机制研究 | 第85-90页 |
| 4 讨论 | 第90-93页 |
| 第四章 Tat PTD-Es穿透眼球屏障的能力与体内药效学研究 | 第93-102页 |
| 1 实验材料 | 第93-94页 |
| ·实验动物 | 第93页 |
| ·常用溶液配制方法 | 第93页 |
| ·试剂与材料 | 第93-94页 |
| ·实验中所用的仪器设备 | 第94页 |
| 2 实验方法 | 第94-96页 |
| ·Tat PTD-Es穿透眼球屏障的研究 | 第94-95页 |
| ·Tat PTD-Es对脉络膜新生血管(CNV)的作用 | 第95-96页 |
| 3 实验结果 | 第96-100页 |
| ·Tat PTD-Es穿透眼球屏障的研究 | 第96-97页 |
| ·Tat PTD-Es对CNV的作用 | 第97-100页 |
| 4 讨论 | 第100-102页 |
| 总结与展望 | 第102-104页 |
| 1 全文结论 | 第102页 |
| 2 创新点 | 第102-103页 |
| 3 展望 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-114页 |
| 附录 | 第114-118页 |
| 发表文章 | 第118-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 博士期间发表的论文 | 第151-152页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第152页 |
