| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 1 绪论 | 第15-25页 |
| ·论文的研究目的和意义 | 第15页 |
| ·研究目的 | 第15页 |
| ·研究意义 | 第15页 |
| ·国内外研究现状 | 第15-21页 |
| ·间充质干细胞 | 第15-17页 |
| ·骨形态发生蛋白 | 第17页 |
| ·BMPs 对间充质干细胞成骨分化的影响 | 第17-18页 |
| ·调控骨发生的主要信号通路和转录因子 | 第18-21页 |
| ·论文研究内容、技术路线及预期结果 | 第21-25页 |
| ·论文的研究内容 | 第21-23页 |
| ·技术路线 | 第23页 |
| ·预期结果 | 第23-25页 |
| 2 GH 质粒的构建和腺病毒的包装、扩增 | 第25-37页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及配制 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·pAdtrace-GH 质粒的构建 | 第28-30页 |
| ·GH 腺病毒重组子的构建 | 第30-31页 |
| ·包装腺病毒 | 第31页 |
| ·扩增获得高滴度腺病毒 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-34页 |
| ·成功构建 pAdtrace-GH 质粒 | 第32-33页 |
| ·成功构建 pAdtrace-GH 重组子 | 第33页 |
| ·AdR-GH 的包装与扩增 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 3 免疫荧光法检测 C3H10T1/2 细胞 MSC 标志物的表达 | 第37-43页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第37页 |
| ·主要试剂及配制 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·细胞培养 | 第38页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-40页 |
| ·细胞培养 | 第39页 |
| ·免疫荧光染色 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 4 过表达 GH 对 BMP9 介导的 MSCs 体外成骨分化的影响 | 第43-59页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第43页 |
| ·主要试剂及配制 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·RT-PCR 检测 GH 在 BMP9 刺激的 C3H10T1/2 细胞中的表达 | 第45-47页 |
| ·石蜡切片苏木精-伊红（H&E）染色 | 第47-48页 |
| ·石蜡切片免疫组化染色 | 第48-49页 |
| ·ALP 活性的检测 | 第49页 |
| ·ALP 免疫组化染色 | 第49页 |
| ·细胞免疫组化染色 | 第49-50页 |
| ·茜素红染色 | 第50页 |
| ·实验数据的统计分析 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-56页 |
| ·AdR-GH 感染 C3H10T1/3 细胞 | 第51页 |
| ·RT-PCR | 第51-52页 |
| ·H&E 染色和免疫组化染色 | 第52-53页 |
| ·ALP 活性检测 | 第53页 |
| ·ALP 染色 | 第53-54页 |
| ·细胞免疫组化染色 | 第54-55页 |
| ·茜素红染色 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 5 GH 和 BMP9 在器官培养中的作用研究 | 第59-65页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·实验动物 | 第59页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第59页 |
| ·主要试剂及配制 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·器官培养 | 第60页 |
| ·石蜡切片 H&E 染色 | 第60页 |
| ·实验数据的统计分析 | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-63页 |
| ·E18.5 天小鼠后肢器官培养 | 第61-62页 |
| ·E18.5 天小鼠后肢石蜡切片 H&E 染色 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 6 过表达 GH 对 BMP9 介导的 MSCs 体内成骨分化的影响 | 第65-77页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·实验动物 | 第65页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第65页 |
| ·主要试剂及配制 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| ·干细胞移植 | 第66页 |
| ·MicroCT 分析 | 第66页 |
| ·异位骨石蜡切片 H&E 染色 | 第66页 |
| ·免疫组织化学染色检测骨桥蛋白和骨钙素在异位骨组织中的表达 | 第66页 |
| ·石蜡切片阿辛蓝染色 | 第66-67页 |
| ·Masson’s Trichrome 染色 | 第67-68页 |
| ·实验数据的统计分析 | 第68页 |
| ·实验结果 | 第68-75页 |
| ·干细胞移植 | 第68-69页 |
| ·利用 MicroCT 对异位骨进行 3D 重建以及定量分析 | 第69-71页 |
| ·异位骨 H&E 染色 | 第71页 |
| ·骨桥蛋白和骨钙素在异位骨组织中的表达 | 第71-73页 |
| ·异位骨的阿辛蓝染色 | 第73-74页 |
| ·Masson’s Trichrome 染色 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 7 GH 和 BMP9 协同促进 MSCs 成骨分化的机制研究 | 第77-91页 |
| ·引言 | 第77-78页 |
| ·实验材料 | 第78-80页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第78页 |
| ·主要试剂及配制 | 第78-80页 |
| ·实验方法 | 第80-84页 |
| ·免疫共沉淀（ChIP） | 第80-83页 |
| ·小分子抑制剂对 C3H10T1/2 细胞 ALP 活性的影响 | 第83页 |
| ·GH 和小分子抑制剂对 IGF1 表达的影响 | 第83-84页 |
| ·实验数据的统计分析 | 第84页 |
| ·实验结果 | 第84-87页 |
| ·免疫共沉淀（ChIP） | 第84-85页 |
| ·小分子抑制剂对 C3H10T1/2 细胞 ALP 活性的影响 | 第85-86页 |
| ·GH 和小分子抑制剂对 IGF1 表达的影响 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-88页 |
| ·本章小结 | 第88-91页 |
| 8 结论与展望 | 第91-95页 |
| ·主要结论 | 第91-92页 |
| ·论文不足之处与后继工作展望 | 第92-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-119页 |
| 附录 | 第119-122页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第119-122页 |
