表达HIV-1外膜蛋白细胞模型的构建及鉴定
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 1 艾滋病细胞与动物模型研究进展 | 第11-15页 |
| ·艾滋病简介 | 第11-12页 |
| ·艾滋病细胞模型研究进展 | 第12页 |
| ·艾滋病动物模型研究进展 | 第12-14页 |
| ·展望 | 第14-15页 |
| 2 慢病毒载体研究进展 | 第15-20页 |
| ·病毒载体简介 | 第15-16页 |
| ·慢病毒载体简介 | 第16-17页 |
| ·慢病毒载体种类和特点 | 第17-18页 |
| ·慢病毒载体应用现状 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19-20页 |
| 3 本研究的意义 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-34页 |
| 1 材料 | 第21-25页 |
| ·菌株、质粒、细胞 | 第21页 |
| ·酶与试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·各种溶液及培养基 | 第22-25页 |
| 2 方法 | 第25-34页 |
| ·目的基因的克隆 | 第25-27页 |
| ·重组质粒pLV-gp120的构建 | 第27页 |
| ·重组质粒pLV-gp120的表达 | 第27-30页 |
| ·慢病毒的包装 | 第30-32页 |
| ·细胞模型的构建 | 第32-33页 |
| ·细胞模型的功能验证 | 第33-34页 |
| 结果 | 第34-47页 |
| 1 目的基因gp120的克隆与测序 | 第34-37页 |
| ·目的基因gp120的克隆 | 第34-35页 |
| ·目的基因Gp120的测序 | 第35-37页 |
| 2 重组质粒pLV-120的构建与表达 | 第37-40页 |
| ·重组质粒pLV-120的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pLV-120转染293T细胞 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR检测 | 第38页 |
| ·免疫印迹检测 | 第38-39页 |
| ·GP120蛋白的激光共聚焦检测 | 第39-40页 |
| 3 重组慢病毒的包装与鉴定 | 第40-43页 |
| ·质粒大提与浓度测定 | 第40页 |
| ·转染参数的选择 | 第40-41页 |
| ·慢病毒包装的荧光检测 | 第41页 |
| ·重组慢病毒的RT-PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组慢病毒的滴度测定 | 第42页 |
| ·重组慢病毒的电镜观察 | 第42-43页 |
| 4 细胞模型的鉴定 | 第43-45页 |
| ·外源基因整合的检测 | 第43-44页 |
| ·转录水平的检测 | 第44页 |
| ·蛋白水平的检测 | 第44-45页 |
| 5 细胞模型的筛选 | 第45页 |
| 6 细胞模型功能验证 | 第45-47页 |
| ·重组导向制剂CVN的SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·重组导向制剂CVN与靶细胞结合的ELISA检测 | 第45-47页 |
| 讨论 | 第47-50页 |
| 1 表达HIV-1 外膜蛋白细胞模型的分子设计 | 第47-49页 |
| 2 假型慢病毒的构建与鉴定 | 第49页 |
| 3 表达HIV-1外膜蛋白细胞模型的活性检测 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58页 |
